一株产壳聚糖酶的芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，涉及一株产壳聚糖酶的芽孢杆菌及其应用。该菌株命名为芽孢杆菌(Bacillus sp)HZ20

【技术实现步骤摘要】
rDNA基因具体如下：
[0013]GGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAATGGATTAAGAGCTTGCTCTTATGAAGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCATAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATAACATTTTGAACCGCATGGTTCGAAATTGAAAGGCGGCTTCGGCTGTCACTTATGGATGGACCCGCGTCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCTAGTTGAATAAGCTGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGTGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACACTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGAAGTTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAACCCTAGAGATAGGGCTTCTCCTTCGGGAGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAAAGAGCTGCAAGACCGCGAGGTGGAGCTAATCTCATAAAACCGTTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGGGGTAACCTTTT
[0014]本专利技术还提供产壳聚糖酶的芽孢杆菌的应用，所述产壳聚糖酶的芽孢杆菌在发酵培养基中进行发酵培养，以得到壳聚糖酶。
[0015]在本专利技术的一个实施方式中，所述发酵培养基中的碳源包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、麦芽糖和可溶性淀粉。
[0016]在本专利技术的一个实施方式中，所述发酵培养基中的氮源包括花生饼粉、牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、黄豆饼粉、麸皮、尿素、氨水和硫酸铵。
[0017]本专利技术提供的产壳聚糖酶的芽孢杆菌进行发酵培养的过程中，能够在发酵培养基中不添加多余微量元素的情况下高效产酶。
[0018]在本专利技术的一个实施方式中，所述产壳聚糖酶的芽孢杆菌进行发酵培养时，还可以在发酵培养基中添加生长因子，所述的生长因子包括V
B1
、V
B3
、V
B5
、V
B7
和V
B12
，其中V
B5
为最佳生长因子。
[0019]在本专利技术的一个实施方式中，进行发酵培养时的条件为：pH范围为4.0
‑
11.0，温度范围为28
‑
42℃，转速50
ꢀ‑
250r/min、震荡培养0
‑
108小时。
[0020]优选地，进行发酵培养时的条件为：pH范围为4.0
‑
10.0，温度范围为28
‑
42℃，转速120
‑
200r/min、震荡培养0
‑
108小时。
[0021]在本专利技术的一个实施方式中，所述产壳聚糖酶的芽孢杆菌进行发酵培养的步骤为：
[0022]产壳聚糖酶的芽孢杆菌通过保存芽孢杆菌属菌种的斜面，取1
‑
2环菌接入种子培养基活化培养，得到活化后的菌液；
[0023]将活化后的菌液按2％
‑
10％的接种量接入发酵培养基中进行发酵培养。
[0024]在本专利技术的一个实施方式中，所述产壳聚糖酶的芽孢杆菌在发酵培养基中进行发酵培养时，发酵培养基中含有乳糖2.5g/L、蛋白胨25g/L，V
B5 6mg/L，pH 6.2，且不含有微量元素。
[0025]本专利技术提供的所述芽孢杆菌能够在适宜产酶条件和适宜产酶培养基条件下高效产酶，粗酶液酶活可达到15
‑
60U/mL。在最佳产酶条件和最佳产酶培养基条件下高效产酶，粗酶液酶活可达到60U/mL以上。
[0026]本专利技术还提供一种工业化生产壳聚糖酶制剂，含有所述产壳聚糖酶的芽孢杆菌。
[0027]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点及有益效果：
[0028]本专利技术以芽孢杆菌属细菌用于产胞外分泌型壳聚糖酶，通过对菌体的培养条件优化，如对产酶培养基进行优化，对碳源、氮源、微量元素等进行优化，筛选出最佳的产酶培养条件，以产酶量和酶活作为考察指标，对菌体发酵产酶的工艺条件进行了优化，从而得到了了利用芽孢杆菌属细菌产壳聚糖酶的最佳工艺条件，进行高效产酶，酶活可高达60U/mL。
[0029]本专利技术所述的芽孢杆菌产一种无需底物诱导的结构型壳聚糖酶。该菌在产酶的过程中无需壳聚糖诱导，也不受外接环境的胁迫下。该酶经检测属于组成型酶，非诱导酶。
[0030]本专利技术所述的产壳聚糖酶的芽孢杆菌对工业化生产壳聚糖酶制剂提供了一株优势菌种。
附图说明
[0031]图1为产壳聚糖酶的菌株(HZ20
‑
1)的菌体形态；
[0032]图2为产壳聚糖酶的菌株(HZ20本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株产壳聚糖酶的芽孢杆菌，其特征在于，该菌株命名为芽孢杆菌(Bacillus sp)HZ20
‑
1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2023172，保藏日期为2023年02月22日，保藏地址是中国湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。2.权利要求1所述产壳聚糖酶的芽孢杆菌的16S rDNA基因，其特征在于，序列如SEQ ID NO.1所示。3.权利要求1所述产壳聚糖酶的芽孢杆菌的应用，其特征在于，所述产壳聚糖酶的芽孢杆菌在发酵培养基中进行发酵培养，以得到壳聚糖酶。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述发酵培养基中的碳源选自蔗糖、乳糖、葡萄糖、麦芽糖或可溶性淀粉中的一种或几种的组合。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述发酵培养基中的氮源选自花生饼粉、牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、黄豆饼粉、麸皮、尿素、氨水或硫酸铵中的一种或几种的组合。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述发酵培养基中不添加多余微量元素的情况下高效产酶。7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产壳聚糖酶的芽孢杆菌进行发酵培养时，还在发酵培养基中...

【专利技术属性】
技术研发人员：张硕，唐雨欣，陈炬龙，段柱良，
申请(专利权)人：上海应用技术大学，
类型：发明
国别省市：