一种利用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物构建的酶组装体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种利用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物构建的酶组装体及其制备方法和应用，本发明专利技术方法包括：将聚乙二醇马来酰亚胺衍生物与酶交联，获得酶组装体；其中：所述酶由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列单一突变所得，所述单一突变是用半胱氨酸残基的置换。本发明专利技术还涉及了由该方法构建得到的酶组装体及其应用。本发明专利技术通过简单高效的方法实现了蛋白质在特定位点的组装，成功制备了相对空间定位可控的酶组装体。采用本发明专利技术方法形成的酶组装体能够在基本不影响酶活性的基础上，进一步提高酶的热稳定性。性。性。

【技术实现步骤摘要】
一种利用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物构建的酶组装体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地，本专利技术涉及酶组装领域，更具体地，本专利技术涉及一种利用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物构建的酶组装体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]相关技术中，提高酶稳定性的方法有：交联酶聚集体技术或活性包涵体技术；交联酶聚集体技术是一种用盐、有机溶剂或非离子聚合物等沉淀剂沉淀酶蛋白，得到酶聚集体，再用交联剂交联的无载体固定化方法。活性包涵体技术是指通过在酶分子的序列末端融合表达疏水或两亲性多肽，多肽之间的非特异性作用导致酶在表达过程中形成有活性的聚集体，即活性包涵体。以上两种技术都能够提高酶的稳定性，但因为其仅仅是将酶分子杂乱的聚集在一起，使得酶的聚集体的整体活性降低。
[0003]因此，如何精确设计酶组装体，使其能够在不影响酶的催化活性的基础上，提高酶的稳定性，具有较大的应用价值。目前，已经开发了许多关于蛋白质组装体的设计策略，驱动蛋白质组装的作用力主要有SpyTag
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SpyCatcher形成的异肽键、分选酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物驱动酶组装的方法，其特征在于，该方法包括：将聚乙二醇马来酰亚胺衍生物与酶交联，获得酶组装体；其中：所述酶由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列单一突变所得，所述单一突变是用半胱氨酸残基的置换；所述聚乙二醇马来酰亚胺衍生物含有至少两个马来酰亚胺端基。2.根据权利要求1所述一种用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物驱动酶组装的方法，其特征在于，所述单一突变为以下任意一种：(1)28位天冬酰胺突变为半胱氨酸；(2)34位的苏氨酸突变为半胱氨酸；(3)100位的天冬酰胺突变为半胱氨酸；(4)180位的谷氨酰胺突变为半胱氨酸；(5)194位的甘氨酸突变为半胱氨酸；(6)220位的天冬氨酸突变为半胱氨酸。3.根据权利要求2所述一种用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物驱动酶组装的方法，其特征在于，所述单一突变为以下任意一种：28位天冬酰胺突变为半胱氨酸，或者是194位的甘氨酸突变为半胱氨酸，或者是180位的谷氨酰胺突变为半胱氨酸。4.根据权利要求1所述一种用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物驱动酶组装的方法，其特征在于，所述聚乙二醇马来酰亚胺衍生物的结构式为：PEG
‑
X
‑
MAL；其中，PEG为聚乙二醇残基，MAL为马来酰亚胺基；X为PEG与MAL的连接基团，选自：
‑
(CH2)
r
‑
、
‑
(CH2)
r
O
‑
、
‑
(CH2)
r
CO
‑
、
‑
(CH2)
r
NH
‑
、
‑
(CH2)
r
C...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘护，王启彬，李春，冯旭东，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：