厌氧菌分离培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种厌氧菌分离培养基及其制备方法和应用，属于微生物培养技术领域。本发明专利技术为提高苛养难养厌氧菌的分离种类和数量，同时提高酿酒副产物黄水的利用价值，以改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基为基础，加入过滤除菌后的黄水，模拟白酒窖池的特殊酿造生境，得到一种厌氧菌分离培养基，其可有效提高白酒窖池中厌氧菌分离的种类和数量，并实现了酿酒副产物黄水的回收利用。酿酒副产物黄水的回收利用。

【技术实现步骤摘要】
厌氧菌分离培养基及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于微生物培养
，具体涉及一种厌氧菌分离培养基及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]浓香型白酒采用独特的泥窖发酵，大曲、窖泥和酒醅中丰富的微生物共同发酵相互作用，产生己酸乙酯等香味物质，是造就其特殊风味的关键，也是浓香型白酒与其他香型白酒的最大区别。浓香型白酒窖池菌群结构的研究，对于探究微生物相互作用和风味物质形成之间的关系至关重要，但其中富含的苛养难养的厌氧微生物难以分离。
[0003]浓香型白酒酿造过程中，微生物分解代谢产生大量的游离水，游离水向窖池底部渗透，形成了棕黄色或者褐色的液体，被称之为黄水。黄水中富含淀粉和蛋白质分解产生的葡萄糖、氨基酸等营养物质，也含有有机酸、单宁、香味前体物质等微生物代谢产物。但目前将黄水用于制备培养基的报道较少。
[0004]平板培养法是研究浓香型白酒酿造过程中菌群结构最直接的方法，然而由于分离生境复杂，普通的培养基难以有效分离其中苛养难养的厌氧微生物。

技术实现思路

[0005]本专利技术为提高苛养难养厌氧菌的分离种类和数量，同时提高酿酒副产物黄水的利用价值，提高了一种厌氧菌分离培养基及其制备方法和应用，本专利技术培养基特别适合浓香型白酒窖池微生物的分离培养。
[0006]为实现上述目的，本专利技术首先提供了一种厌氧菌分离培养基的制备方法，其包括：
[0007]将改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基以体积比1
±
0.1：1
±
0.1进行配比(即混合均匀)，经灭菌、冷却后，加入过滤除菌后的黄水，混匀，得厌氧菌分离培养基；其中，控制所述改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基的体积之和与所述过滤除菌后的黄水的体积的比例为1：1％～15％。
[0008]优选的，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，控制所述改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基的体积之和与所述过滤除菌后的黄水的体积的比例为1：3％～10％。
[0009]更优选的，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，控制所述改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基的体积之和与所述过滤除菌后的黄水的体积的比例为4～6％。
[0010]其中，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，所述过滤除菌后的黄水为：黄水通过0.22微米无菌滤膜过滤所得。
[0011]其中，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，所述灭菌为121℃灭菌15min或115℃灭菌20min。
[0012]其中，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，所述冷却为冷却至50～55℃。
[0013]其中，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，所述改良PYG培养基的配方为：
[0014]胰蛋白胨5.0g/L，蛋白胨5.0g/L，酵母粉10.0g/L，牛肉膏5.0g/L，葡萄糖5.0g/L，
K2HPO42.0g/L，吐温80 1.0mL/L，NaHCO
3 0.4g/L，NaCl 0.08g/L，KH2PO
4 0.04g/L，MgSO4·
7H2O0.02g/L，CaCl2·
2H2O 0.01g/L，刃天青1.0mg/L，氯化血红素5mg/L，维生素K1 1mg/L，半胱氨酸盐酸盐0.5g/L和琼脂15.0g/L，pH为7.2。
[0015]其中，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，所述蛋白瘤胃球菌培养基的配方为：
[0016]胰蛋白胨5.0g/L，酵母粉2.0g/L，葡萄糖3.0g/L，纤维二糖2.0g/L，(NH4)2SO
4 0.8g/L，NaCl 0.48g/L，KH2PO
4 0.24g/L，K2HPO
4 0.24g/L，MgSO4·
7H2O 0.1g/L，CaCl2·
2H2O 0.064g/L，刃天青1.0mg/L，Na2CO
3 4.0g/L，脂肪酸溶液1mL/L，半胱氨酸盐酸盐0.5g/L和琼脂15.0g/L，pH为7.0。
[0017]具体的，可以采用以下方法配制改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基：
[0018]改良PYG培养基的配制：称取胰蛋白胨5.0g，蛋白胨5.0g，酵母粉10.0g，牛肉膏5.0g，葡萄糖5.0g，K2HPO
4 2.0g，吐温80 1.0mL，NaHCO
3 0.4g，NaCl 0.08g，KH2PO
4 0.04g，MgSO4·
7H2O 0.02g，CaCl2·
2H2O 0.01g，刃天青1.0mg，蒸馏水定容至1000mL，加热煮沸3～5分钟，冷却后添加5mg氯化血红素、1mg维生素K1、0.5g半胱氨酸盐酸盐和15.0g琼脂，调节pH值为7.2；
[0019]蛋白瘤胃球菌培养基的配制：称取胰蛋白胨5.0g，酵母粉2.0g，葡萄糖3.0g，纤维二糖2.0g，(NH4)2SO
4 0.8g，NaCl 0.48g，KH2PO
4 0.24g，K2HPO
4 0.24g，MgSO4·
7H2O 0.1g，CaCl2·
2H2O 0.064g，刃天青1.0mg，蒸馏水定容至1000mL，加热煮沸3～5分钟，冷却后添加4.0g Na2CO3、1mL脂肪酸溶液、0.5g半胱氨酸盐酸盐和15.0g琼脂，调节pH值为7.0。
[0020]本专利技术还提供了上述方法制备所得厌氧菌分离培养基。
[0021]本专利技术还提供了上述方法制备所得厌氧菌分离培养基在分离培养厌氧菌中的应用。一般情况下，只有浓香型白酒生产才涉及到窖泥和黄水，因此本专利技术培养基特别适用于浓香型白酒窖池厌氧菌的分离培养。
[0022]本专利技术的有益效果：
[0023]本专利技术以改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基为基础，加入过滤除菌后的黄水，模拟白酒窖池的特殊酿造生境，得到一种厌氧菌分离培养基，其可有效提高白酒窖池中厌氧菌分离的种类和数量；通过对过滤除菌后的黄水的加入量进行优化，能够进一步提高厌氧菌分离的种类和数量。
[0024]本专利技术显著提高了苛养难养厌氧菌的分离种类和数量，同时实现了酿酒副产物黄水的高价值利用。
具体实施方式
[0025]下面通过实施例对本专利技术作进一步详细说明，但并不因此将本专利技术保护范围限制在所述的实施例范围之中。本专利技术实施例中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
[0026]实施例1
[0027]本实施例提供了一种厌氧菌分离培养基：以改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基为基础，进行1：1混合，121℃灭菌15min，冷却至50℃
‑
55℃后以过滤除菌的方式加入黄水(黄水通过0.22微米的无菌滤膜过滤)。
[0028]本实施例中黄水添加量为1％，培养基命名为PPY
‑
1，具体步骤如下：
[0029](1)准备原料：称取胰蛋白胨5.0g，蛋白胨5.0g，酵母粉10.0g，牛肉膏5.0g，葡萄糖5.0g，K本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.厌氧菌分离培养基的制备方法，其特征在于：将改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基以体积比1
±
0.1：1
±
0.1进行配比，经灭菌、冷却后，加入过滤除菌后的黄水，混匀，得厌氧菌分离培养基；其中，控制所述改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基的体积之和与所述过滤除菌后的黄水的体积的比例为1：1％～15％。2.根据权利要求1所述的厌氧菌分离培养基的制备方法，其特征在于：控制所述改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基的体积之和与所述过滤除菌后的黄水的体积的比例为1：3％～10％。3.根据权利要求2所述的厌氧菌分离培养基的制备方法，其特征在于：控制所述改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基的体积之和与所述过滤除菌后的黄水的体积的比例为4～6％。4.根据权利要求1所述的厌氧菌分离培养基的制备方法，其特征在于：所述过滤除菌后的黄水为：黄水通过0.22微米无菌滤膜过滤所得。5.根据权利要求1所述的厌氧菌分离培养基的制备方法，其特征在于：所述灭菌为121℃灭菌15min或115℃灭菌20min。6.根据权利要求1所述的厌氧菌分离培养基的制备方法，其特征在于：所述冷却为冷却至50～55℃。7.根据权利要求1～6任一项所述的厌氧菌分离培养基的制备方法，其特征在于：所述改良PYG培养基的配方为：胰蛋白胨5.0g/L，蛋白胨5.0g/L，酵母粉10...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵东，姚粟，翟磊，王洪，刘瑞娜，张京涛，
申请(专利权)人：宜宾五粮液股份有限公司，
类型：发明
国别省市：