Claudin4蛋白单克隆抗体的制备方法、免疫试纸条、试剂盒及其应用技术

本发明专利技术公开一种Claudin4蛋白单克隆抗体的制备方法、免疫试纸条、试剂盒及其应用，所述Claudin4蛋白单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：S20、将带有粘性末端的Claudin4基因序列插入酶切的质粒中，获得重组质粒；S30、将所述重组质粒鉴定测序后，转入感受态细胞中，获得阳性菌；S40、将所述阳性菌接入培养基中，振荡培养，加入诱导剂诱导表达后，超声波裂解，分离上清与沉淀，获得上清液；S50、将所述上清液经层析柱纯化，获得纯化的Claudin4抗原。本发明专利技术所制备的Claudin4蛋白单克隆抗体，能通用检出大多数上皮来源的癌细胞，实现较高的灵敏度、特异性和可重复性。特异性和可重复性。特异性和可重复性。

【技术实现步骤摘要】
Claudin4蛋白单克隆抗体的制备方法、免疫试纸条、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及生物检测
，特别涉及一种Claudin4蛋白单克隆抗体的制备方法、免疫试纸条、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤，尤其是晚期上皮来源的癌常常发生转移，体腔转移是常见发生部位，体腔转移癌占所有体腔转移的恶性肿瘤的95％。体腔内可以检获胸水、腹水、心包积液、盆腔积液、脑积液等标本，利用这些标本进行细胞涂片，细胞蜡块和免疫组化检查可以发现癌转移。但是这些方法需要有经验的病理医师和病理设备完成，有一定的技术要求，费用高，时间长。
[0003]通过搜索引擎和专利网站搜索发现有一些针对转移癌的检测产品。但这些现有产品主要表现出以下不足：一，部分产品只能检出单一癌症，需要专科医生在做过相关检查并详细了解病史的前提下选择使用；二，部分产品不能进行快速检测，耗时较长；三，不能定量分析，不能进行治疗效果评估。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是提出一种Claudin4蛋白单克隆抗体的制备方法、免疫试纸条、试剂盒及本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Claudin4蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S10、查找Claudin4基因序列，扩增所述Claudin4基因序列的外显子全长，并设计所述Claudin4基因序列的粘性末端，得到带有粘性末端的Claudin4基因序列；S20、将带有粘性末端的Claudin4基因序列插入酶切的质粒中，获得重组质粒；S30、将所述重组质粒鉴定测序后，转入感受态细胞中，获得阳性菌；S40、将所述阳性菌接入培养基中，振荡培养，加入诱导剂诱导表达后，超声波裂解，分离上清与沉淀，获得上清液；S50、将所述上清液经层析柱纯化，获得纯化的Claudin4抗原；S60、将所述纯化的Claudin4抗原免疫动物，制备脾细胞悬液，将所述脾细胞悬液与骨髓瘤细胞混合，加入促融合剂，获得杂交瘤细胞；S70、从所述杂交瘤细胞中筛选出能产生Claudin4抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增，获得克隆纯化的杂交瘤细胞；S80、将克隆纯化的杂交瘤细胞注射到动物腹腔，进行扩增，提取杂交瘤细胞并收集分泌的Claudin4蛋白单克隆抗体。2.如权利要求1所述的Claudin4蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S40中，所述诱导表达的温度为15～20℃；和/或，所述诱导表达的时间为3～7h；和/或，所述诱导剂包括异丙基
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硫代半乳糖苷。3.如权利要求1所述的Claudin4蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S40中，所述培养基为LB液体培养基；和/或，所述培养基包括卡那霉素。4.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋春樊，杨眉，邢辉，
申请(专利权)人：襄阳市中心医院，
类型：发明
国别省市：