一种工程菌的构建方法及其应用技术

本申请公开一种工程菌的构建方法及其应用。所述构建方法包括以下步骤：在宿主菌株中导入DNA片段I，得到所述工程菌；所述DNA片段I从上游到下依次包括：启动子、融合基因、终止子；所述融合基因从上游到下依次包括：TPS基因、连接肽I的编码基因、LPPS基因；所述宿主菌株选自酿酒酵母中的任一种。所述构建方法优化了宿主菌株的香紫苏醇合成酶，有利于提高香紫苏醇的产率。苏醇的产率。苏醇的产率。

【技术实现步骤摘要】
一种工程菌的构建方法及其应用


[0001]本专利技术属于微生物代谢工程及工业生物
，涉及一种工程菌的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]香紫苏醇(sclareol)又称硬尾醇，作为一种半日花烷型二萜叔醇，最初在鼠尾草属唇形香料植物香紫苏(Salvia sclarea)中提取并由此得名。香紫苏醇是龙涎香替代品——龙涎醚合成最普遍的原料。龙涎香是抹香鲸分泌的一种蜡质物质，自古以来因其麝香和甜土气味被用作高端香水的固定成分。然而，抹香鲸濒临灭绝的现状造就了龙涎醚不可再生的宝贵性，因此利用香紫苏醇合成龙涎醚已经成为香水工业生产天然龙涎香替代品的主要方法。香紫苏醇在医药和农药上同样具有重要的生物活性。如香紫苏醇具有很强的抗菌活性以及在真菌生长调节和植物生长抑制方面起作用，并且对人类的白血病细胞(Dimas et al.,Leuk Res,1999,23:217
‑
234)、肿瘤细胞株 (Mahaira et al.,Eur J Pharmacol,2011,666:173
‑
182)、结肠癌细胞及异种移植物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：在宿主菌株中导入DNA片段I，得到所述工程菌；所述DNA片段I从上游到下依次包括：启动子、融合基因、终止子；所述融合基因从上游到下依次包括：TPS基因、连接肽I的编码基因、LPPS基因；所述宿主菌株选自酿酒酵母中的任一种。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述融合基因从上游到下依次包括：MBP基因、连接肽II的编码基因、TPS基因、连接肽I的编码基因、LPPS基因；或所述融合基因从上游到下依次包括：TPS基因、连接肽I的编码基因、LPPS基因、连接肽II的编码基因、MBP基因；优选地，所述LPPS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述TPS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述MBP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述连接肽I的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述连接肽II的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示；所述启动子选自P
eTDH3
、P
GAL7
中的任意一种；所述终止子选自T
PYX212
、T
ADH1
中的任意一种；优选地，所述在宿主菌株中导入DNA片段I为将DNA片段I整合到宿主的XI
‑
3基因位点。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括优化MVA的合成途径，包括(a)～(h)中的至少一种：(a)敲除宿主菌株的GAL80基因；(b)将tHMG1基因导入宿主菌株；(c)将SpHMGR基因导入宿主菌株；(d)将宿主菌株基因组上ERG20基因突变为ERG20
F96C
基因；(e)将HMG2
K6R
基因和ERG10基因导入宿主菌株；(f)将含有2个拷贝HMG2
K6R
基因的DNA片段导入宿主菌株；(g)将宿主菌株中ERG9基因的启动子替换为P
HXT1
；(h)将含有BTS1和PaGGPPS基因的DNA片段导入宿主菌株；所述(a)～(h)不分先后顺序；优选地，包括(a)～(h)中的至少一种：(a)敲除宿主菌株的GAL80基因；(b)将含有FAA4
‑
T
AHD1
‑
P
THD3
‑
tHMG1的DNA片段整合到宿主菌株的FAA4基因位点；(c)将含有POX1
‑
T
TDH2
‑
P
tHXT7
‑
SpHMGR的DNA片段整合到宿主菌株的POX1基因位点；(d)将宿主菌株基因组上ERG20基因突变为ERG20
F96C
基因；(e)将含有T
ENO2
‑
HMG2
K6R
‑
P
GAL10
‑1‑
ERG10
‑
T
PYK1
的DNA片段整合到宿主菌株的XII
‑
2基因位点；(f)将含有T
PDC1
‑
HMG2
K6R
‑
P
GAL10
‑1‑
HMG2
K6R
‑
T
ENO2
的DNA片段整合到宿主菌株的XII
‑
3基因位点；(g)将宿主菌株中ERG9基因的启动子替换为P
HXT1
；
(h)将含有P
GAL7
‑
BTS1
‑
PaGGPPS
‑
T
TDH2
的DNA片段整合到宿主菌株的XI
‑
2基因位点；所述(a)～(h)不分先后顺序。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括优化中心代谢途径，包括(A)～(N)中的至少一种：(A)将MmACL基因导入宿主菌株；(B)将RtME基因导入宿主菌株；(C)将
‘
MDH3基因导入宿主菌株；(D)将CTP1基因导入宿主菌株；(E)将宿主菌株的PYC1基因启动子P
PYC1
替换为启动子P
TEF1
；(F)将MPC1基因导入宿主菌株；(G)将MPC3基因导入宿主菌株；(H)将AnACLa基因、AnACLb基因导入宿主菌株；(I)将RtCIT1基因导入宿主菌株；(J)将IDP2基因导入宿主菌株；(K)将YHM2基因导...

【专利技术属性】
技术研发人员：周雍进，曹选，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：