氰胺诱导的酿酒酵母工程菌及其构建方法技术

本发明专利技术涉及一种氰胺诱导的酿酒酵母工程菌及其构建方法，其构建方法包括：将酿酒酵母菌中的半乳糖调控系统的转录抑制因子Gal80敲除，将酿酒酵母菌中的转录激活因子Gal4的启动子替换为氰胺诱导型DDI2/3启动子，所获的酿酒酵母工程菌可以使氰胺诱导系统偶联半乳糖(GAL)表达系统，实现氰胺剂量响应的GAL表达系统信号输出。当氰胺诱导系统用于调控酿酒酵母菌中内源ARO1突变体(N端降解子融合于AroD组份)的活性时，该表达系统表现出良好的低渗漏特征。因此，采用上述方法构建可得到严谨可控且高效的酿酒酵母蛋白表达系统，未来可应用于高效表达蛋白。高效表达蛋白。

【技术实现步骤摘要】
氰胺诱导的酿酒酵母工程菌及其构建方法


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体涉及一种氰胺诱导的酿酒酵母工程菌及其构建方法。

技术介绍

[0002]酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是酵母种属中应用最广泛的菌株，也是最早实现工业化生产的微生物之一，其工业化应用历程反映了生物产业的发展。
[0003]在工业生产方面，酿酒酵母菌株具备良好的生产性能。相较于多数细菌菌株，酿酒酵母具备耐酸、不易受噬菌体等菌株污染的优点。酵母能够在低pH下进行发酵，这不仅减少用于控制pH的碱液消耗，而且能简化除盐工艺，有效降低了产品的分离成本。正是因为酿酒酵母强鲁棒性和集成分离工艺的经济性，在生产菌株性能差距不大的情况下，工业规模的生产会倾向于选择酿酒酵母菌株进行生产。
[0004]然而，想要最大化目标化合物的产量，就需要优化平衡酿酒酵母胞内代谢流、缓解细胞生产的代谢压力、解决降低中间产物积累等问题，以实现目标化合物高产量、高产率、高转化。要实现上述目的，调控合成途径酶的表达便是关键。
[0005]选用不同强度的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氰胺诱导的酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于，包括：将酿酒酵母菌中的Gal80敲除，将酿酒酵母菌中的Gal4启动子替换为氰胺诱导型DDI2/3启动子，在酿酒酵母菌内源的ARO1基因的AROD组分融合N端降解子，以便获得重组酿酒酵母菌。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，以酿酒酵母基因组为模板，以核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的Gal80_del_F和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的Gal80_del_R为引物，经PCR扩增得到Gal80敲除片段。3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，以酿酒酵母CEN.PK2
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1C基因组为模板，以核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的DDI2_IntGal4_F和核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示的DDI2_IntGal4_R为引物，经PCR扩增得到DDI2/3启动子序...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁吉锋，宋婧雅，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：