一种产3-羟基丙酸的工程菌及其构建方法与应用技术

本申请公开了一种产3

【技术实现步骤摘要】
一种产3
‑
羟基丙酸的工程菌及其构建方法与应用


[0001]本专利技术属于微生物代谢工程及工业生物
，涉及一种产3
‑
羟基丙酸的工程菌及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]3‑
羟基丙酸(3HP)被美国能源部列为生物质来源的12种最具价值的平台化合物，3
‑
HP聚合形成聚3
‑
羟基丙酸(poly3
‑
HP)，作为可降解塑料，可减少白色污染。3
‑
HP经脱水可获得丙烯酸，丙烯酸是重要的合成树脂单体，聚合速度非常快，可合成树脂、涂料、橡胶等。3
‑
HP经脱水、腈化可获得丙烯腈，丙烯腈是合成纤维、合成橡胶和合成树脂的重要单体，由丙烯腈制得聚丙烯腈纤维即腈纶(Chen et al.Metab.Eng.,2014,22,104
‑
109)。传统的3
‑
HP合成方法为化学合成法，主要是将3
‑
羟基丙腈加入氢氧化钠溶液中反应，化学法需要用到大量溶剂，不符合环保理本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产3
‑
羟基丙酸的工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：在宿主菌株中导入MCRC基因和MCRN基因，并将宿主菌株的FAS1基因的启动子P
FAS1
替换为P
HXT1
；所述MCRC基因编码的多肽为来源于Chloroflexus aurantiacus的丙二酰
‑
CoA还原酶的1
‑
549氨基酸；所述MCRN基因编码的多肽为来源于Chloroflexus aurantiacus的丙二酰
‑
CoA还原酶的550
‑
1219氨基酸的突变体N940V/K1106W/S1114R；所述宿主菌株选自酿酒酵母中的任一种。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述MCRC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述MCRN基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述在宿主菌株中导入MCRC基因和MCRN基因选自(a)～(c)中的任一种：(a)将DNA片段P
GAL7
‑
MCRN
‑
T
DIT1
整合到宿主菌株的XI
‑
1位点；将含有P
GAL1,10
‑
MCRC
‑
T
TDH2
的游离型质粒转入宿主菌株；(b)将DNA片段P
GAL7
‑
MCRN
‑
T
DIT1
整合到宿主菌株的XI
‑
1位点；将含有P
GAL1,10
‑
MCRC
‑
T
TDH2
的游离型质粒转入宿主菌株；将DNA片段P
TDH3
‑
MCRN
‑
T
FBA1
‑
T
DIT1
‑
MCRC
‑
P
TDH3
整合到宿主菌株的XII
‑
3位点；(c)将DNA片段P
GAL7
‑
MCRN
‑
T
DIT1
整合到宿主菌株的XI
‑
1位点；将DNA片段P
TDH3
‑
MCRN
‑
T
FBA1
‑
T
DIT1
‑
MCRC
‑
P
TDH3
整合到宿主菌株的XII
‑
3位点；将DNA片段T
FBA1
‑
MCRN
‑
P
GAL1,10
‑
MCRC
‑
T
DIT1
整合到宿主菌株的XII
‑
5位点。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括强化中心碳代谢途径：将MmACL、RtME、
’
MDH3、CTP1、MPC1、MPC3、AnACLa、AnACLb、RtCIT1、IDP2、YHM2、GND1、TKL1、TAL1和ZWF1基因导入宿主菌株；将宿主菌株的PYC1基因的启动子由P
PYC1
替换为P
TEF
；将宿主菌株的PGI1基因的启动子由P
PGI1
替换为P
COX9
；将宿主菌株的ACC1基因的启动子由P
ACC1
替换为P
TEF
；将宿主菌株的IDH2基因的启动子由P
IDH2
替换为P
GSY1
；优选地，所述构建方法还包括强化中心碳代谢途径：将DNA片段P
TPI
‑
M...

【专利技术属性】
技术研发人员：周雍进，禹伟，曹选，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：