一种去除RNA样本中rRNA的方法技术

本发明专利技术公开一种去除RNA样本中rRNA的方法，首先设计rRNA特异性引物，所述rRNA特异性引物包括28S引物对和18S引物对；接着利用所述rRNA特异性引物对提取的RNA样本进行扩增、变性、环化、纯化，获得纯化产物；利用滚环复制引物组和所述纯化产物制备rRNA长探针；再将所述rRNA长探针与待处理的RNA样本进行混合杂交，然后使用磁珠吸附，获得去除rRNA后的RNA样本。本发明专利技术的检测方法仅依靠一步磁珠纯化即可去除样品中的特定序列，不同于现有技术中常用的利用RNaseH、DNAase消化序列方法、这样可以大大节省流程时间、降低建库成本。降低建库成本。降低建库成本。

【技术实现步骤摘要】
一种去除RNA样本中rRNA的方法


[0001]本专利技术涉及涉及基因生物领域，特别涉及rRNA
，具体涉及一种去除RNA样本中rRNA的方法。

技术介绍

[0002]遗传中心法则表明，DNA是生物体内遗传信息的载体。遗传信息在精密的调控下从DNA转录成RNA，再传递到蛋白质。因此RNA被认为是DNA与蛋白质之间生物信息传递的“桥梁”，在研究转录组信息中占有着重大的作用。
[0003]随着人类基因组计划（HGP）和DNA元件百科全书计划（ENCODE）的完成，人们发现在人类基因组中大部分DNA都可以转录成RNA，但是仅有1.5%的核苷酸序列用于蛋白质的编码，剩余不编码蛋白质的的非编码RNA（ncRNA），被认为是基因组转录噪音。这种转录组噪音（无效信息）基本全部来源于丰度最高的成员——rRNA，而核糖体RNA(rRNA) 约占RNA总量的 80%，是最多的一类RNA，通常这类RNA分子量比较大且代谢不活跃，在进行全转录组测序建库过程中，需要将这些冗余序列去除掉，提高数据利用效率。现有方法主要包括生物素耦联的探针抓取法和探针辅助的R本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种去除RNA样本中rRNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：S10、设计rRNA特异性引物，所述rRNA特异性引物包括28S引物对和18S引物对；S20、利用所述rRNA特异性引物对提取的RNA样本进行扩增、变性、环化、纯化，获得纯化产物；S30、利用滚环复制引物组和所述纯化产物制备rRNA长探针；S40、将所述rRNA长探针与待处理的RNA样本进行混合杂交，然后使用磁珠吸附，获得去除rRNA后的RNA样本。2.如权利要求1所述去除RNA样本中rRNA的方法，其特征在于，设计rRNA特异性引物，所述rRNA特异性引物包括28S引物对和18S引物对的步骤中，所述28S引物对的正向引物的5
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端和所述18S引物对的正向引物的5
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端均含有磷酸根修饰，所述28S引物对的反向引物的5
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端和所述18S引物对的反向引物的5
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端均不含磷酸根，且序列一致。3.如权利要求2所述去除RNA样本中rRNA的方法，其特征在于，所述28S引物对的正向引物的序列如SEQ ID NO：1所示；和/或，所述28S引物对的反向引物的序列如SEQ ID NO：2所示；和/或，所述18S引物对的正向引物的序列如SEQ ID NO：3所示；和/或，所述18S引物对的反向引物的序列如SEQ ID NO：4所示。4.如权利要求1所述去除RNA样本中rRNA的方法，其特征在于，利用所述rRNA特异性引物对提取的RNA样本进行扩增、变性、环化、纯化，获得纯化产物的步骤包括：提取RNA样本，合成cDNA，以所述cDNA为模板，利用所述rRNA特异性引物进行PCR扩增，得到扩增产物；将所述扩增产物经过变性形成DNA单链分子，然后在连接酶或环化酶作用下使分子内成环，获得环化DNA分子；利用线性DNA消化酶降解所述环化DNA分子中未成环的DNA分子，再使用磁珠对所述环化DNA分子进行纯化，获得纯化产物。5.如权利要求1所述去除RNA样本中rRNA的方法，其特征在于，利用滚环复制引物组和所述纯化产物制备rRNA长探针的步骤包括：所述滚环复制组包括第一滚环复制引物、第二滚环复制引物、第四滚环复制引物、第五滚环复制引物、第六滚环复制引物、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张怡然，段小红，郝艳同，周冰，王冰，周启明，
申请(专利权)人：求臻医学科技浙江有限公司，
类型：发明
国别省市：