一种表达几丁质酶的重组菌的构建及高酶活突变体的制备制造技术

本发明专利技术公开了一种表达几丁质酶的重组菌的构建及高酶活突变体的制备，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明专利技术使用内源性强启动子SpoVG及信号肽YqxI实现了地衣芽孢杆菌来源的几丁质酶BlChiA在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WS9中的分泌表达，并进一步定点突变，提高了几丁质酶的表达量与耐酸性。所得几丁质酶突变体E336K/A472T的发酵酶活达2.67U/mL，同时，该几丁质酶突变体最适反应pH为5.0，且在pH 3.0

【技术实现步骤摘要】
一种表达几丁质酶的重组菌的构建及高酶活突变体的制备


[0001]本专利技术涉及一种表达几丁质酶的重组菌的构建及高酶活突变体的制备，属于基因工程和酶工程


技术介绍

[0002]几丁质又称甲壳素、甲壳质、甲壳胺等，是N
‑
乙酰
‑
D
‑
氨基葡萄糖通过β
‑
1,4
‑
糖苷键连接而成的直链多糖，脱乙酰化程度在40％以上时可转化为壳聚糖，是海洋中含量最丰富、自然界中含量仅次于纤维素的第二大可再生资源。几丁质及其类似物的降解产物氨基寡糖具备优越的生理功能和生物活性，在农业、医药和食品等领域有广泛的应用。
[0003]几丁质酶(EC 3.2.1.14)是一类水解几丁质β
‑
1,4
‑
糖苷键生成几丁寡糖或单糖的糖基水解酶，大多数几丁质酶属于糖基水解酶18家族和19家族，还有少数分布在20、23和48家族。几丁质酶在几丁质的降解中应用广泛，由于几丁质只溶于强无机酸，因此，几丁质的降解过程中需要一种耐酸性强的几丁质酶，但是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种几丁质酶BlChiA突变体，其特征在于，将SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的第336位、472位中至少一个位点进行突变。2.如权利要求1所述几丁质酶BlChiA突变体，其特征在于，所述突变体包括以下任一种：(a)将SEQ ID NO.4所示氨基酸第336位的谷氨酸突变为赖氨酸；(b)将SEQ ID NO.4所示氨基酸第472位的丙氨酸突变为苏氨酸；(c)将SEQ ID NO.4所示氨基酸第336位的谷氨酸突变为赖氨酸，第472位的丙氨酸突变为苏氨酸。3.编码如权利要求1或2所述突变体的基因。4.携带如权利要求3所述基因的重组载体，其特征在于，所述载体为pHY300PLK系列载体。5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于，含有如SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的启动子P
SpoVG
。6.如权利要求5所述的重组载体，其特征在于，以SEQ ID NO.6所示核苷酸序列编码的YqxI为信号肽。7.一种表达几丁质酶BlChiA的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以Bacillus ...

【专利技术属性】
技术研发人员：宿玲恰，吴敬，袁源，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：