一种比活和耐酸性提高的几丁质酶BlChiA突变体制造技术

本发明专利技术公开了一种比活和耐酸性提高的几丁质酶BlChiA突变体，属于酶工程领域。本发明专利技术以枯草芽孢杆菌作为表达宿主，重组表达来源于地衣芽孢杆菌的几丁质酶基因BlChiA并进行定点突变获得一系列的优势突变体，突变体E469G在pH4.0的条件下有最高酶活力，与野生型相比更适应酸性环境，适合生产应用；突变体E336K/E469G/A472T提高了几丁质酶BlChiA的催化效率，比活较野生型提高1.56倍，有利于降低其生产成本；突变体D26N/E336K/E469G/A472T对酸性条件的耐受能力增强，在pH3.0

【技术实现步骤摘要】
一种比活和耐酸性提高的几丁质酶BlChiA突变体


[0001]本专利技术涉及一种比活和耐酸性提高的几丁质酶BlChiA突变体，属于酶工程


技术介绍

[0002]几丁质又称甲壳素，是自然界中含量仅次于纤维素的天然高分子多糖，广泛存在于虾蟹、昆虫等甲壳类动物外壳及节肢动物外骨骼中，是真菌细胞壁的基本组分。由于天然存在的几丁质性质稳定，难溶于水、稀酸、碱，只溶于强无机酸，故很难被高效利用。据估计自然界每年生物合成的几丁质可达10
10
‑
10
11
吨，其降解产物氨基寡糖具有更优越的水溶性，可进行多种化学修饰，具备多种生理功能，在农业、食品、医药等领域有极佳的应用价值。
[0003]几丁质酶(EC 3.2.1.14)能催化水解N
‑
乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)多聚物中的β
‑
1,4
‑
糖苷键，根据与底物作用的位置不同，几丁质酶可分为β
‑
N
‑
乙酰葡萄糖苷酶、内切几丁质酶和外切几丁质酶。其中β
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种几丁质酶突变体，其特征在于，将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第26位、323位、469位中一个或多个位点进行突变。2.根据权利要求1所述几丁质酶突变体，其特征在于，所述突变包括以下任一：(a)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第469位的谷氨酸残基突变为甘氨酸残基；(b)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第469位的谷氨酸残基突变为甘氨酸残基，第472位的丙氨酸残基突变为苏氨酸残基；(c)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第26位的天冬氨酸残基突变为天冬酰胺残基，第469位的谷氨酸残基突变为甘氨酸残基，第472位的丙氨酸残基突变为苏氨酸残基；(d)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第323位的甘氨酸残基突变为天冬氨酸残基，第469位的谷氨酸残基突变为甘氨酸残基，第472位的丙氨酸残基突变为苏氨酸残基；(e)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第336位的谷氨酸残基突变为赖氨酸残基，第469位的谷氨酸残基突变为甘氨酸残基，第472位的丙氨酸残基突变为苏氨酸残基；(f)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第26位的天冬氨酸残基突变为天冬酰胺残基，第336位的谷氨酸残基突变为赖氨酸残基，第469位的谷氨酸残基突变为甘氨酸残基，第472位的丙氨酸残基突变为苏氨酸残基；(g)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第26位的天冬氨酸残基突变为天冬酰胺残基，第323位的甘氨酸残基突变为天冬氨酸残基，第336位的谷氨酸残基突变为赖氨酸残基，第469位的谷氨酸残基突变为甘氨酸残基，第472位的丙氨酸残基突变为苏氨酸残基。3.编码如权利要求1或2所述突变体的基因。4.携带如权利要求3所述基因的重组载体，其特征在于，以pHY300PL...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，宿玲恰，袁源，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：