柿单宁凝胶固定啤酒酵母菌的制备方法技术

一种柿单宁凝胶固定啤酒酵母菌的制备方法，由提取柿单宁、配制溶液、制备啤酒酵母菌菌悬液、制备柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌、柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌保存步骤组成。采用本发明专利技术制备的柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌，用扫描电镜观测其表面微观结构，柿单宁凝胶呈不规则的表面形态，凝胶内部具有较疏松的多孔网状结构，为固定化细胞的栖息和繁殖提供了良好的微环境，便于营养物质和代谢物质的传递，适合微生物的生长，有利于啤酒酵母菌的繁殖。柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌与游离酵母菌菌悬液、海藻酸钠－钙固定的酵母菌包埋剂的发酵效果对比实验表明，在同一条件，柿单宁溶液和明胶溶液形成凝胶，固定的啤酒酵母菌的真实发酵度高，达８６．５１％。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种柿单宁凝胶固定啤酒酵母菌的制备方法，其特征在于他是由下述步骤组成：　（１）提取柿单宁　取打浆机粉碎的青柿果，按青柿果与提取剂、盐酸的质量比为１∶４∶０．０５加入提取器的烧瓶中，在９０℃回流提取２０分钟，再重复提取２次，合并３次提取液，室温静置１小时，抽滤，除去残渣，滤液用旋转薄膜蒸发仪于４５～５０℃减压浓缩至相对密度为１．２～１．３ｇ／ｃｍ↑［３］、蒸发，除去提取剂，得粗提取物，将活化好的ＡＢ－８大孔吸附树脂装入３．５ｃｍ×８０ｃｍ色谱柱中，粗提取物加蒸馏水稀释至１０ｍｇ／ｍＬ，以２ｍＬ／分钟上柱，充分吸附，用蒸馏水淋洗至洗出液用苯酚－硫酸法检测不出糖为止，再用３倍柱床体积的提取剂以２ｍＬ／分钟洗脱，将洗脱液用旋转薄膜蒸发仪于４５～５０℃蒸发，除去提取剂和部分水，再用真空冷冻干燥机真空干燥，冷阱温度为－５０℃，绝对真空度为５０～１００Ｐａ，得到柿单宁粗品；　上述的提取剂是质量浓度为５０％的甲醇水溶液、质量浓度为５０％的丙酮水溶液、质量浓度５０％乙醇水溶液、蒸馏水中的任意一种，盐酸为分析纯；　（２）配制溶液　用无菌蒸馏水将柿单宁粗品配制成质量浓度为３％～６％的单宁水溶液，用蒸馏水配制质量浓度为２．５％～４％的明胶水溶液和质量浓度为１％～３％的聚乙烯醇水溶液；　（３）制备啤酒酵母菌菌悬液　将啤酒酵母菌在２５ｍＬ麦芽汁液体培养基中３０℃活化２４小时，再在２５０ｍＬ麦芽汁培养基中３０℃扩大培养３天，制备成啤酒酵母菌增殖培养液，装入无菌离心管中，３０００转／分钟离心１０分钟，倾去上清液，得到菌体，用无菌蒸馏水洗涤菌体，在相同条件再离心菌体，得湿菌体，加入无菌蒸馏水，制成菌液浓度为２．８×１０↑［１０］个／ｍＬ的啤酒酵母菌菌悬液，备用；　上述的麦芽汁培养基是可溶性固形物浓度为１０％的麦芽汁培养基；　（４）制备柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌　将质量浓度为２．５％～４％的明胶水溶液和交联剂在１１０℃灭菌１５分钟，冷却至２５～４５℃，将质量浓度为２．５％～４％的明胶水溶液和交联剂混合，搅拌均匀，加入菌液浓度为２．８×１０↑［１０］个／ｍＬ的啤酒酵母菌菌悬液，混合均匀，２５～４５℃水浴中保温，搅拌过程中缓慢加入质量浓度为３％～６％的单宁水溶液，质量浓度为２．５％～４％的明胶水溶液与交联剂、菌液浓度为２．８×１０↑［１０］个／ｍＬ的啤酒酵母菌菌悬液、质量浓度为３％～６％的单宁水溶液的体积比为１∶０．０２５∶０．２５∶１，单宁与明胶发...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张宝善，姜烛，陈锦屏，王军，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]