一种动物乳汁样本中微生物总DNA提取试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种动物乳汁样本中微生物总DNA提取试剂盒及方法，属于分子生物学技术领域。其中，所述试剂盒包括裂解试剂，所述裂解试剂中包括裂解液、溶菌酶和蛋白酶K，所述裂解试剂中还包括交联的或未交联的聚乙烯吡咯烷酮，所述裂解液中包括2％的CTAB、1.4M NaCl、20mM EDTA和100mM Tris

【技术实现步骤摘要】
一种动物乳汁样本中微生物总DNA提取试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体地，涉及一种动物乳汁样本中微生物总DNA提取试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]动物乳汁是我们生活中常用乳制品加工的原料，乳汁中的微生物的含量是影响乳制品等食品质量安全的重要因素，检测动物乳汁微生物种类尤其重要。由于动物乳汁中所有的微生物不能完全通过体外培养的方式被培养出来，因此通过纯培养的方式不能鉴定到动物乳汁中含有的全部微生物种类。目前，利用PCR扩增鉴定微生物种类，能有效检测出大量未培养微生物，然而，此方法需要提取得到较高的微生物DNA的量及纯度，因此，提取乳汁中微生物DNA是检测动物乳汁中微生物的重要环节。
[0003]从动物乳汁中提取微生物总DNA有很多种方法，目前，国内外提取动物乳汁微生物总DNA的方法主要有：(1)苯酚——氯仿法，其操作步骤较为复杂、耗时长，造成样本损失的同时，也容易造成各乳汁样本之间的污染，残留的酚等有机物对聚合酶有一定抑制作用；(2)核酸纯化柱法，由于其复杂性和较高的成本，使得难以运用到大批量乳汁样本的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种动物乳汁样本中微生物总DNA提取试剂盒，包括裂解试剂，所述裂解试剂中包括裂解液、溶菌酶和蛋白酶K，其特征在于，所述裂解试剂中还包括交联的或未交联的聚乙烯吡咯烷酮。2.根据权利要求1所述的一种动物乳汁样本中微生物总DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液中包括2％的CTAB、1.4M NaCl、20mM EDTA和100mM Tris
‑
HCl。3.根据权利要求1所述的一种动物乳汁样本中微生物总DNA提取试剂盒，其特征在于，还包括漂洗液和洗脱液。4.根据权利要求2所述的一种动物乳汁样本中微生物总DNA提取试剂盒，其特征在于，所述漂洗液为有机醇溶液。5.根据权利要求2所述的一种动物乳汁样本中微生物总DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液选自TE缓冲液、Tris
‑
HCl缓冲液和水。6.利用权利要求1所述一种动物乳汁样本中微生物总DNA提取试剂盒提取动物乳汁样本中微生物总DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，分别动物乳汁样本200μL于2mL灭菌离心管中，在7000～10000
×
g，4℃条件下离心8～15min，去除上层悬浮液；S2，向所述灭菌离心管中加入等体积的所述裂解液，再加入质量体系分数为1～5％的交联聚乙烯吡咯烷酮、30～80μL 100mg/mL的溶菌酶和15～20μL 20mg/mL蛋白酶K，研磨5～15min；S3，将研磨后的样本置于...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴允正，李振，陈秀雯，李晓萌，
申请(专利权)人：杭州联川生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：