十三肽衍生物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了十三肽衍生物及其制备方法和应用。本发明专利技术保护一株多粘类芽孢杆菌，即多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CPCC 101223，保藏登记号为CGMCC No.22854。本发明专利技术还保护化合物的制备方法，包括如下步骤：发酵培养多粘类芽孢杆菌CPCC 101223，得到化合物。本发明专利技术还保护化合物或其药学上可接受的盐在制备细菌抑制剂中的应用。本发明专利技术还保护细菌抑制剂，其含有化合物或其药学上可接受的盐。本发明专利技术化合物来源与多粘类芽孢杆菌，制备工艺简单，具有较好的抗革兰阴性耐药菌活性，为阐明十三肽抗菌活性的构效关系提供了理论基础，适宜于抗革兰阴性耐药菌先导化合物研究或制备抗革兰阴性耐药菌药物。抗革兰阴性耐药菌药物。

【技术实现步骤摘要】
十三肽衍生物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及十三肽衍生物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]近年来由于多种因素导致的愈发严重的细菌耐药问题，如“超级细菌”的出现，使得细菌耐药性和耐药菌感染成为当前全球抗感染治疗和抗菌药物研发领域面临的巨大挑战。
[0003]2017年WHO发布首份急需研发新抗生素的重点病原体清单，其中1类重点包括：碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)、铜绿假单胞菌(CRPA)和肠杆菌科细菌(CRE)。这些“超级细菌”均为革兰阴性耐药菌。目前临床上用于治疗革兰阴性耐药感染的有效药物并不多，多粘菌素类药物往往作为“最后一道防线”使用。近些年已经在肺炎克雷伯杆菌和大肠埃希菌中发现了多粘菌素的抗性基因mcr
‑
1，多粘菌素在临床上的作用也受到了挑战。开发新的抗革兰阴性耐药菌药物或其先导化合物极具紧迫性。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供十三肽衍生物及其制备方法和应用。
[0005]本专利技术提供一株多粘类芽孢杆菌，即多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CPCC 101223，已于2021年07月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.22854。
[0006]本专利技术还提供了通式化合物的制备方法，包括如下步骤：发酵培养多粘类芽孢杆菌CPCC 101223，得到通式化合物。
[0007]具体的，所述制备方法包括如下步骤：用培养基发酵培养多粘类芽孢杆菌CPCC 101223，得到发酵产物，从所述发酵产物中得到所述通式化合物。
[0008]所述培养基具体可为微生物培养基。
[0009]所述培养基具体可为发酵培养基。
[0010]用培养基发酵培养多粘类芽孢杆菌CPCC 101223的方法具体包括如下步骤：
[0011](1)将多粘类芽孢杆菌CPCC 101223接种发酵培养基中，振荡培养；
[0012](2)完成步骤(1)后，在体系中加入大孔吸附树脂，振荡培养，得到发酵产物。
[0013]用培养基发酵培养多粘类芽孢杆菌CPCC 101223的方法具体包括如下步骤：
[0014](1)将多粘类芽孢杆菌CPCC 101223接种至发酵培养基中，振荡培养20h；
[0015](2)完成步骤(1)后，在体系中加入大孔吸附树脂，振荡培养4h，得到发酵产物。
[0016]用培养基发酵培养多粘类芽孢杆菌CPCC 101223的方法具体包括如下步骤：
[0017](1)将100mL多粘类芽孢杆菌CPCC 101223种子液接种至1L发酵培养基中，振荡培养20h；
[0018](2)完成步骤(1)后，在体系中加入100mL大孔吸附树脂，振荡培养4h，得到发酵产
物。
[0019]用培养基发酵培养多粘类芽孢杆菌CPCC 101223的方法具体包括如下步骤：
[0020](1)将100mL多粘类芽孢杆菌CPCC 101223种子液接种至1L发酵培养基中，30℃、200r/min振荡培养20h；
[0021](2)完成步骤(1)后，在体系中加入100mL大孔吸附树脂，30℃、200r/min振荡培养4h，得到发酵产物。
[0022]以上任一所述种子液的制备方法，包括如下步骤：挑取多粘类芽孢杆菌CPCC 101223单菌落，接种至种子培养基中，振荡培养，得到种子液。
[0023]以上任一所述种子液的制备方法，包括如下步骤：挑取多粘类芽孢杆菌CPCC 101223单菌落，接种至种子培养基中，振荡培养16h，得到种子液。
[0024]以上任一所述种子液的制备方法，包括如下步骤：挑取多粘类芽孢杆菌CPCC 101223单菌落，接种至100mL种子培养基中，30℃、200r/min振荡培养16h，得到种子液。
[0025]种子培养基(TSB培养基)：含胰蛋白胨15g/L、大豆蛋白胨5g/L、氯化钠5g/L，余量为水；pH为7.0
‑
7.4。
[0026]发酵培养基：含玉米粉30g/L、可溶性淀粉10g/L、酵母粉1g/L、硫酸铵5g/L、碳酸钙10g/L，余量为水；pH为7.0
‑
7.4。
[0027]从所述发酵产物中得到所述通式化合物的方法包括如下步骤：
[0028](1)取所述发酵产物，收集大孔吸附树脂并将其转移至层析柱中，然后依次用去离子水、40％异丙醇水溶液、80％异丙醇水溶液洗脱层析柱，收集80％异丙醇水溶液进行洗脱时的过柱后洗脱液。
[0029](2)取步骤(1)收获的过柱后洗脱液，进行固体上样并进行色谱分离纯化，获得Fr.4和/或Fr.5；
[0030](3)取步骤(2)获得的Fr.4，进行固体上样并进行色谱分离纯化，获得Fr.4
‑
4和/或Fr.4
‑
5和/或Fr.4
‑
6和/或Fr.4
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7和/或Fr.4
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8和/或Fr.4
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10和/或Fr.4
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11和/或Fr.4
‑
12和/或Fr.4
‑
13；
[0031](4)取Fr.5和/或Fr.4
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4和/或Fr.4
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5和/或Fr.4
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6和/或Fr.4
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7和/或Fr.4
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8和/或Fr.4
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10和/或Fr.4
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11和/或Fr.4
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12和/或Fr.4
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13，通过液相色谱分离纯化获得所述通式化合物。
[0032]从所述发酵产物中得到所述通式化合物的方法的所述步骤(1)为：取24L所述发酵产物，收集大孔吸附树脂并将其转移至层析柱中(柱体积2L)，然后依次用10L去离子水、20L 40％异丙醇水溶液、30L 80％异丙醇水溶液洗脱层析柱，收集80％异丙醇水溶液进行洗脱时的过柱后洗脱液。
[0033]步骤(1)中，所述洗脱的流速为2倍柱体积/h。
[0034]从所述发酵产物中得到所述通式化合物的方法的所述步骤(2)为：取步骤(1)收集的过柱后洗脱液，浓缩，然后加入溶胀后的YMC ODS
‑
AQ
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HG填料拌匀，然后浓缩蒸干，得到固体样品；将固体样品填充至样品柱，然后连接色谱柱，用色谱仪进行分离纯化。
[0035]从所述发酵产物中得到所述通式化合物的方法的所述步骤(2)为：取步骤(1)收集的过柱后洗脱液，采用旋转蒸发仪浓缩至100ml，然后加入10mL溶胀后的YMC ODS
‑
AQ
‑
HG填料拌匀，然后浓缩本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.化合物的制备方法，包括如下步骤：发酵培养多粘类芽孢杆菌CPCC 101223，得到化合物；所述化合物为如下通式的化合物：X1‑
X2‑
Dab
‑
Gly
‑
Ser
‑
Trp
‑
Ser
‑
Dab
‑
Dab
‑
X3‑
Glu
‑
Val
‑
X4‑
Ala；X1为3
‑
羟基
‑6‑
甲基辛酸、6
‑
甲基庚酸、6
‑
甲基辛酸，3
‑
羟基
‑8‑
甲基壬酸、3
‑
羟基癸酸或3
‑
羟基
‑8‑
甲基癸酸；X2为Gly或Val；X3为Val、Ile或Trp；X4为Val或Ile；多粘类芽孢杆菌CPCC 101223即多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CPCC 101223，其保藏登记号为CGMCC No.22854。2.多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CPCC 101223，其保藏登记号为CGMCC No.22854。3.权利要求2所述多粘类芽孢杆菌的培养物，是将权利要求2所述多粘类芽孢杆菌进行培养得到的物质。4.权利要求2所述多粘类芽孢杆菌在制备权利要求5所述的化合物中的应用。5.如下通式的化合物：X1‑
X2‑
Dab
‑
Gly
‑
Ser
‑
Trp
‑
Ser
‑
Dab
‑
Dab
‑
X3‑
Glu
‑
Val
‑
X4‑
Ala；X1为3
‑
羟基
‑6‑
甲基辛酸、6
‑
甲基庚酸、6
‑
甲基辛酸，3
‑
羟基
‑8‑
甲基壬酸、3
‑
羟基癸酸或3

【专利技术属性】
技术研发人员：余利岩，王浩，李鑫鑫，方晓梅，柏菁璘，赵莉莉，刘红宇，苏静，
申请(专利权)人：中国医学科学院医药生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：