一种III型胶原蛋白肽及其制备方法技术

本发明专利技术属于多肽制备技术领域，具体公开了一种III型胶原蛋白肽及其制备方法，包括：S1、原料脱脂、超声、发酵得总蛋白粗提物；S2、酸性条件下提取胶原蛋白粗提物；S3、加澄清剂去除杂蛋白；S4、加凝结芽孢杆菌发酵得到III型胶原蛋白；S5、加复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵；S6、分离纯化得III型胶原蛋白肽成品。本发明专利技术制备的III型胶原蛋白肽，其平均分子量为300

【技术实现步骤摘要】
一种III型胶原蛋白肽及其制备方法


[0001]本专利技术属于多肽制备
，具体涉及一种III型胶原蛋白肽及其制备方法。

技术介绍

[0002]胶原蛋白肽是将大分子胶原蛋白经蛋白酶降解后制成的小分子肽类产品，具有较高的消化吸收性。胶原蛋白肽能够促进骨的形成，增强低钙水平下的骨胶原结构，从而提高骨强度，以达到预防骨质疏松的作用；胶原蛋白肽还具有保护胃黏膜和抗溃疡、抗过敏的作用；特别的是，胶原蛋白肽还具有极好的美容效果，有提高皮肤水分、减少皱纹，抗衰老等作用，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用，其作为口服美容产品的基本原料，也已经为广大消费者接受。
[0003]胶原蛋白有20多种类型，目前对于I型和II胶原蛋白肽的研究较多，已经实现工业化生产。如王琳在《Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究》中，以猪皮为材料，比较了酸溶法、酶解法、中性盐溶液法三种粗提的方法，发现酶解法进行粗提得率最高，并结合高效液相色谱进行分离纯化制得Ⅰ型胶原蛋白，该方法具有高效性、高选择性，所得Ⅰ型胶原蛋白具有防止UVA氧化损伤的作用。专利CN114085285A公开了一种具有骨关节养护功效的高纯II型胶原蛋白肽的制备方法及其应用，经软骨除杂、骨粒清洗、骨粒酶解、多级过滤、纳滤除杂浓缩、树脂精制除杂、杀菌、浓缩、喷雾干燥步骤制得高纯II型胶原蛋白肽，该方法能够大大提高II型胶原蛋白肽的含量，实现速溶性较好的胶原蛋白颗粒粉的制备。
[0004]目前III型胶原蛋白肽的制备主要集中在胶原蛋白的重组表达，即由基因重组技术制备的经设计、修饰后的特定基因编码的氨基酸序列或其片段，或是这类功能性氨基酸序列片段的组合。而从动物组织中提取III胶原蛋白的研究较少。
[0005]专利CN101717804A公开了一种医用级III型胶原的制备方法，具体是新鲜新生犊牛皮作为原料进行前处理，然后用限制胃蛋白酶降解法和盐析法提取I和III型胶原混合物，接着用Tris
‑
NaCl缓冲液溶解掉大部分的I型胶原，Tris
‑
HCl缓冲液使胶原变性制得III型胶原。
[0006]尽管目前对于III型胶原蛋白肽的开发研究已经取得了一定的进展，但从动物组织提取III胶原蛋白仍存在难度大、纯度低、成本高等严峻问题。因此，开发一种III型胶原蛋白肽的制备方法至关重要。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种III型胶原蛋白肽及其制备方法，所得III型胶原蛋白肽的含有III型胶原蛋白的标志性肽段，平均分子量为300
‑
3000道尔顿，能够用于改善皮肤水分，促进机体内III型胶原蛋白生成，起到延缓组织老化的作用。
[0008]为了实现上述技术目的，本专利技术采取如下技术方案。
[0009]第一方面，一种III型胶原蛋白肽的制备方法，包括：S1、原料脱脂、超声、发酵得总蛋白粗提物；S2、酸性条件下提取胶原蛋白粗提物；S3、加澄清剂去除杂蛋白；S4、凝结芽孢杆菌发酵得到III型胶原蛋白；S5、复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵；S6、分离纯化得III型胶原蛋白肽成品。
[0010]本申请通过采用上述方法，优化了从动物组织中提取III型胶原蛋白肽的生产条件，特别是通过凝结芽孢杆菌发酵、复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵工艺相互协调、共同作用，获得III型胶原蛋白肽，其含有III型胶原蛋白的标志性肽段，平均分子量在300
‑
3000道尔顿范围之间，并且安全无毒副作用，易于消化，可以作为药品、化妆品、保健食品和食品的原料，并且能够添加至酸性饮料中，能够用于改善皮肤水分，促进机体内III型胶原蛋白生成。
[0011]在一个优选的实施方式中，所述步骤S1的具体操作为：将原料浸于NaOH溶液中浸泡，取出后水洗至中性，然后按照料液质量比1:5
‑
40与水混合，超声1
‑
3次，取出物料并重新加入到1
‑
10倍体积的水中，按照料液重量接种一定量的枝孢菌和/或法马塔假丝酵母发酵，得到总蛋白粗提物。
[0012]进一步地，步骤S1中，所述原料是动物皮、鳞或骨中的一种，优选为罗非鱼、鳕鱼、羊皮、牛皮、禽类皮中的任一种。
[0013]进一步地，步骤S1中，所述NaOH溶液的质量分数为0.1
‑
5%，浸泡时间为4
‑
18h。
[0014]进一步地，步骤S1中，所述超声的功率为150
‑
400W，超声风速为5
‑
500m/s，超声时间为10
‑
80min，超声次数为1
‑
3次。
[0015]进一步地，步骤S1中，所述枝孢菌的接种量为1
‑8×
105cfu/g，法马塔假丝酵母的接种量为1
‑8×
105cfu/g。
[0016]进一步地，步骤S1中，所述发酵温度为25
‑
35℃，发酵时间为2
‑
10h。
[0017]在另一个优选的实施方式中，所述步骤S2的具体操作为：总蛋白粗提物加入到2
‑
50倍质量的纯化水中，调节总蛋白粗提物的pH值至2
‑
5，加热至50
‑
90℃，保温提胶2
‑
8h，制得胶原蛋白粗提物。
[0018]在另一个优选的实施方式中，所述步骤S3的具体操作为：调节胶原蛋白粗提物pH为2
‑
7，加入澄清剂，静置2
‑
8h去除杂蛋白，取上清液备用。
[0019]进一步地，步骤S3中，所述澄清剂为大豆多糖、蛋清和土豆淀粉的混合物，混合质量比为1:2
‑
4:1
‑
3；澄清剂的加入量为胶原蛋白粗提物质量的0.5
‑
3%。
[0020]在另一个优选的实施方式中，所述步骤S4的具体操作为：向步骤S3所得上清液中加入凝结芽孢杆菌，调节pH至6
‑
7.5，40
‑
55℃下发酵2
‑
6h得到III型胶原蛋白。
[0021]进一步地，步骤S4中，所述凝结芽孢杆菌的添加量为溶液质量的0.1
‑
1%。
[0022]在另一个优选的实施方式中，所述步骤S5的具体操作步骤为：将III型胶原蛋白调节pH值为7.5
‑
8.0，加入复合蛋白酶酶解，得到酶解液；调节酶解液pH至6
‑
7.5，按酶解液重量接种一定量的模仿葡萄球菌发酵，得酶解发酵液。
[0023]进一步地，步骤S5中，所述复合蛋白酶为碱性蛋白酶和自制蛋白酶的组合，自制蛋
白酶为生姜蛋白酶和鱿鱼内脏蛋白酶，三种酶的质量比为2.5
‑
4:0.8
‑
1.5:1，优选为3:1:1；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种III型胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括：S1、原料脱脂、超声、发酵得总蛋白粗提物；S2、酸性条件下提取胶原蛋白粗提物；S3、加澄清剂去除杂蛋白；S4、凝结芽孢杆菌发酵得到III型胶原蛋白；S5、复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵；S6、分离纯化得III型胶原蛋白肽成品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1的具体操作为：将原料浸于NaOH溶液中浸泡，取出后水洗至中性，然后按照料液质量比1:5
‑
40与水混合，超声1
‑
3次，取出物料并重新加入到1
‑
10倍体积的水中，按照料液重量接种一定量的枝孢菌和/或法马塔假丝酵母发酵，得到总蛋白粗提物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述原料是动物皮、鳞或骨中的任一种。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述原料是罗非鱼、鳕鱼、羊皮、牛皮、禽类皮中的任一种。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述枝孢菌的接种量为1
‑8×
105cfu/g，法马塔假丝酵母的接种量为1
‑8×
105cfu/g。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2的具体操作为：总蛋白粗提物加入到2
‑
50倍质量的纯化水中，调节总蛋白粗提物的pH值至2
‑
5，加热至50
‑
90℃，保温提胶2
‑
8h，制得胶原蛋白粗提物。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3的具体操作为：调节胶原蛋白粗提物pH为2
‑
7，加入澄清剂，静置2
‑
8h去除杂蛋白，取上清液备用。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述澄清剂为大豆多糖、蛋清和土豆淀粉的混合物，混合质量比为1:2
‑
4:1
‑
3；澄清剂的加入量为胶原蛋白粗提物质量的0.5
‑
3%。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S4的具体操作为：向步骤S3所得上清液中加入凝结芽孢杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海燕，刘晶琦，刘爱青，
申请(专利权)人：北京盛美诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：