本发明专利技术公开了一种用于肿瘤病理诊断用途的ＨＡｂ１８Ｇ／ＣＤ１４７癌标志物的免疫组织化学诊断试剂盒，包括：去除人组织切片中内源性酶的阻断剂；用于封闭人组织切片中交叉蛋白反应的封闭剂；与人体肿瘤组织中ＨＡｂ１８Ｇ／ＣＤ１４７癌标志物结合的第一抗体；能与第一抗体结合的生物素标记二抗；用来结合二抗的酶标亲和素，显色试剂，及磷酸盐缓冲系统等。该试剂盒具有特异性好、敏感性高、稳定、通用的特点，主要用于上皮源性恶性肿瘤（肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、大肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌等）的病理诊断，有助于肿瘤的预警筛选、早期诊断、定性诊断、治疗反应及疗效监测、肿瘤的复发转移及预后判断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程领域，涉及一种用于临床诊断的试剂盒，特别是一种用于肿瘤病理诊断用途的HAbl8G/CD147癌标志物的免疫组织化学诊断 试剂盒。HAbl8G/CD147癌标志物是一种新型、广谱和较高特异性的癌标志物， 用一种针对HAbl8G/CD147癌标志物的特异性抗体，结合通用的免疫组化 方法，制成HAbl8G/CD147癌标志物免疫组织化学诊断试剂盒，应用于多 种上皮源性恶性肿瘤组织病理标本，进行肿瘤病理诊断，有助于肿瘤的预警 筛选、早期诊断、定性诊断、治疗反应及疗效监测、肿瘤的复发转移及预后 判断。
技术介绍
'近年来，各种肿瘤的发病人数都在急剧上升，肿瘤的医疗费用和肿瘤患 者的死亡都会给社会和家庭造成沉重的负担。人们迫切需要可用于肿瘤的诊 断和治疗的技术手段或方法。当前，以预测医学、预防医学与个体化医疗为 核心的3P医学已经成为保证、提高人类健康水平的重要方向，癌标志物的 发现与应用是实现3P医学的重要关键。癌标志物(tumormarker)是存在于肿瘤细胞内或由其分泌的一种物质， 可分布于血液、组织液、分泌物或肿瘤细胞中。癌标志物的变^:与肿瘤的发 生、发展及预后有着直接关系，如提示肿瘤的性质，了解肿瘤的组织发生、 细胞分化，有助于肿瘤的预警筛选、早期诊断、定性诊断、治疗反应及疗效 监测、肿瘤的复发转移及预后判断，有助于肿瘤的诊断、分子分型及个体化治疗指导。近年来，由于生物技术的快速发展，单抗技术、蛋白组学技术、生物信 息学的应用，大大加快了新型肿瘤标志物的发现与应用。其技术基础大都是通过用抗体筛选肿瘤细胞芯片、cDNA表达文库，结合酵母双杂交、免疫共 沉淀、质谱技术等方法，捕获该抗体所针对的抗原分子。新型肿瘤标志物的 发现与应用，对建立肿瘤预警筛査、早期诊断、定性诊断、治疗反应和转移 复发等预后监测等具有重要作用。免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗 体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。目前免疫组织化学 已广泛应用与临床病理学诊断，特别是用针对性地抗体进行肿瘤辅助诊断和 鉴别诊断，成为临床病理学诊断不可缺少的重要手段。HAbl8G/CD147分子是一种新型癌标志物，该分子为61kDa的跨膜糖 蛋白，由269个氨基酸组成的分子，是用特异性单抗在人肝癌细胞cDNA 表达文库中筛选获得。其单抗为HAb18 (专利号ZL02114471.0)，是用新 鲜人肝癌组织细胞悬液免疫Babl/C小鼠，用杂交瘤技术制备而成。HAbl8G/CD147癌标志物免疫组织化学诊断试剂盒，用于肿瘤病理诊 断，经免疫组化组织谱鉴定，该分子在多种癌组织中高表达，在正常组织和 胚胎组织中极低表达，分布有较好特异性，染色表型为膜型或膜浆型。2006例组织芯片的免疫组化结果表明，HAbl8G/CD147癌标志物在以 下癌症中的表达率为乳腺癌(阳性率71.4%)、肝癌(阳性率80.0%)、 胃癌(阳性率68%)、肺癌(阳性率54.3%)。而在正常肝组织、肝腺瘤 病变组织中为低表达;在乳腺的正常组织、良性肿瘤和良性病变组织为阴性。 应用ABC-APAAP等多种高敏感免疫组化染色法，对肝癌组织切片在光镜和 电镜两个水平上观察HAbl8G的分布与定位，结果显示HAM8G/CD147标志物选择性地高表达于肝癌组织，其阳性率为75% (39/52)，正常肝组织 低表达。免疫电镜(胶体金)定位于肝癌细胞膜、内质网及管泡状结构的单 位膜上。研究结果发表于iVoteom/cs， 7( 13):2151-2161 ，2007;77/WopaAo/og);， 2008。单克隆抗体的问世与免疫组织化学检测系统持续快速的发展，使免疫组 织化学技术在现代病理诊断中的应用日益广泛，且被受病理界的关注与青 迷。最早与70年代初期仅在实验室中科研尝试，历经30年时间后该项技术 己经发展成为常规病理诊断中必不可少的可靠的辅助诊断手段。在常规病理诊断中，大多数病例是可以在HE染色的切片上做出明确的 形态学诊断，有疑难和问题的病例在5-10%。免疫组织化学技术主要通过特 异性抗体染色，对临床病理组织切片做进一步的诊断，分析肿瘤标志物、肿 瘤相关抗原与疾病的关系，以辅助诊断提高病理诊断的准确性。目前临床使用的相关肿瘤标志物抗体有100余种，常用肿瘤诊断的抗体 约有10种，多属研究用抗体，主要是从国外购进后分装出售。无正规批号， 在病理诊断中应用的抗体且抗体批次间差异较大，可重复性差，结果不近人息。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种用于肿瘤病理诊断用途的HAbl8G/CD147 癌标志物的免疫组织化学诊断试剂盒。该诊断试剂盒是利用抗原-抗体特异 性结合的生物学特性，用HAb 18特异性单抗对临床病理组织标本进行染色， 通过SP免疫组化方法，观察HAbl8G/CD147癌标志物在上皮源性恶性肿瘤 中的表达情况，临床应用于上皮源性恶性肿瘤的辅助诊断或鉴别诊断。该试 剂盒具有特异性好、敏感性高、稳定、通用的特点。为了实现上述任务，本专利技术采取如下的技术解决方案 一种用于肿瘤病理诊断用途的HAbl8G/CD147癌标志物的免疫组织化学诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒的内容物包括1) 用于去除人组织切片中内源性酶的阻断剂，该阻断剂是由浓度为3% 的过氧化氢溶液和浓度为80%的甲醇溶液组成；2) 用于封闭人组织切片中交叉蛋白反应非特异性染色的非特异性蛋白 封闭剂；该封闭剂是由3-5%正常动物血清与磷酸盐缓冲液配制而成；3) 与人体癌组织中HAbl8G/CD147癌标志物结合的第一抗体；该第一 抗体是特异性结合HAbl8G/CD147癌标志物的鼠源性单克隆抗体，其使用 浓度为lO-lOOpg/mL;4) 能与第一抗体结合的第二抗体；该第二抗体是生物素标记的羊或兔 抗小鼠IgG的多克隆抗体；5) 用来结合第二抗体上生物素的酶标链霉亲和素；该酶标链霉亲和素 是辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，为显色底物；6) 与显色底物作用的显色试剂，该显色试剂是联苯二胺(DAB)溶液、 三羟甲基氨基甲垸(Tris*Hcl)缓冲液和去离子水配制而成，以上三种试剂 的配制用量体积比为1:1:50。7) 试剂盒所用的缓冲体系为，磷酸盐缓冲液Na2HP04-NaH2PCVNaCl， 浓度为0.01mol/L， pH为7.2~7.45。上述第一抗体在10-100pg/mL浓度的抗体保存液中保存，该抗体保存液 能够维持抗体在2-8'C下保存24个月。本专利技术的用于肿瘤病理诊断用途的HAbl8G/CD147癌标志物免疫组织 化学诊断试剂盒的技术特点是1、该试剂盒中的第一抗体是一个高特异性、广谱性的抗体。 HAbl8G/CD147肿瘤标志物是用第一抗体在人肝癌细胞cDNA表达文库中 筛选获得，HAbl8G/CD147经过对该分子结构分析，证实分子为61kDa的 跨膜糖蛋白，由269个氨基酸组成；经査询Genbank，该分子与人CD147页基因编码序列相同，定位于人19号染色体，是免疫球蛋白超家族的成员。大量的基础研究与应用研究工作基础，深刻揭示了该肿瘤标志物特异性抗体的生物学功能与应用意义。2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于肿瘤病理诊断用途的ＨＡｂ１８Ｇ／ＣＤ１４７癌标志物的免疫组织化学诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒的内容物包括： １）用于去除人组织切片中内源性酶的阻断剂，该阻断剂是由浓度为３％的过氧化氢溶液和浓度为８０％的甲醇溶液组成； ２）用于封闭人组织切片中交叉蛋白反应非特异性染色的非特异性蛋白封闭剂；该封闭剂是由３－５％正常动物血清与磷酸盐缓冲液配制而成； ３）与人体癌组织中ＨＡｂ１８Ｇ／ＣＤ１４７癌标志物结合的第一抗体；该第一抗体是特异性结合ＨＡｂ１８Ｇ／Ｃ Ｄ１４７癌标志物的鼠源性单克隆抗体，其使用浓度为１０－１００μｇ／ｍＬ； ４）能与第一抗体结合的第二抗体；该第二抗体是生物素标记的羊或兔抗小鼠ＩｇＧ的多克隆抗体； ５）用来结合第二抗体上生物素的酶标链霉亲和素；该酶标链霉亲和素是 辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，为显色底物； ６）与显色底物作用的显色试剂，该显色试剂是联苯二胺（ＤＡＢ）溶液、三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ.Ｈｃｌ）缓冲液和去离子水配制而成，以上三种试剂的配制用量体积比为１∶１∶５０。 ７）试剂 盒所用的缓冲体系为，磷酸盐缓冲液Ｎａ↓［２］ＨＰＯ↓［４］－ＮａＨ↓［２］ＰＯ↓［４］－ＮａＣｌ，浓度为０．０１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ为７．２～７．４５。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：米力，陈小春，张阳，陈志南，
申请(专利权)人：陈志南，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]
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