一种检测人类RhD血型基因型的多重PCR方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种能够检测人类ＲｈＤ血型基因型的多重ＰＣＲ方法，以及应用此方法制备的体外诊断试剂盒，可以检测出人类ＲｈＤ血型基因型，包括Ｄ／Ｄ、Ｄ／ｄ、ＤＥＬ、ＤＥＬ／ｄ和ｄ／ｄ基因型。本发明专利技术的方法是利用人类ＲｈＤ血型不同基因型的特异性序列位点的改变，设计多对引物，进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）来完成的。因此，本发明专利技术可被视为是基于ＰＣＲ－ＳＳＰ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐｒｉｍｅｒ，序列特异性引物）的原理而建立的。利用针对不同位点而设计出序列特异性引物，然后通过优化序列特异性引物的混合比例、反应缓冲液组分和ＰＣＲ反应条件，从而达到准确检测出人类ＲｈＤ血型基因型的目的。在一个实施方式中，本发明专利技术提供了一种检测人类ＲｈＤ血型基因型的多重ＰＣＲ方法；在另一实施方式中，本发明专利技术提供了一种检测人类ＲｈＤ血型基因型的试剂盒。本发明专利技术的一个或多个实施方式的细节在附图和说明中有描述。通过阅读附图、详细描述和权利要求可以清楚地了解本发明专利技术的其他特征、目的和优点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种检测人类ＲｈＤ血型基因型的多重ＰＣＲ方法，该方法包括步骤：　（１）在０．５ｍＬ的Ｅｐｅｎｄｏｆｆ内加入１２．８μｌＰＣＲ引物缓冲液、２．０μｌ引物混合物、２．０μｌｄＮＴＰ混合物、０．２μｌＴａｑＤＮＡ聚合酶和３．０μｌ模板ＤＮＡ ，充分混合；　（２）将Ｅｐｅｎｄｏｆｆ管放入ＰＣＲ扩增仪中，９℃变性５分钟，然后进行３５个循环的ＰＣＲ反应，包括９℃、４０秒，５℃、４０秒和７℃、２分钟，随后７℃延伸５分钟，然后将温度降低到４℃；　（３）取出ＰＣＲ产物，４％琼脂 糖凝胶电泳，２００Ｖ２０分钟，紫外灯下观察结果并拍照。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐华，叶世辉，张建耕，邢荷香，
申请(专利权)人：陕西省血液中心，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]