一种显色染料和制备方法及其用途技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种显色染料和制备方法及其用途，本发明专利技术提供的显色染料，包括：3,3'

【技术实现步骤摘要】
一种显色染料和制备方法及其用途


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种显色染料和制备方法及其用途。

技术介绍

[0002]DAB(3,3'
‑
二氨基联苯胺四盐酸盐)显色试剂是免疫学、免疫组织化学等研究及检测领域常用的显色试剂，在临床和科研方面有着广泛应用。其显色原理是：过氧化物在过氧化物酶催化条件下发生化学反应，释放氧化状态氧，继而与显色试剂的无色供氢体发生氧化还原反应，生色物被氧化，形成棕黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位，显色充分后将标本及时脱水封固，其终产物可直接在光镜下观察。
[0003]目前，DAB显色试剂较常用的还是其传统颜色棕色，颜色选择较少，限制了其使用。

技术实现思路

[0004]因此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种显色染料和制备方法及其用途，所述显色试剂实现了DAB显色试剂的颜色改变，使得DAB的棕色变为黄色，增添了一种新的颜色选择，且该颜色的灵敏度和稳定性均不差于传统的DAB染色。
[0005]为此，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0006]一种显色染料，包括：3,3'
‑
二氨基联苯胺四盐酸盐和萘或其类似物或其衍生物。
[0007]可选的，萘或其类似物或其衍生物包括：
[0008][0009]可选的，3,3'
‑
二氨基联苯胺四盐酸盐浓度范围为0.3～5mg/mL，萘或其类似物或其衍生物的浓度范围为质量百分比0.02～0.04wt％；
[0010]可选的，还包括DAB缓冲液。
[0011]一种显色染料的制备方法，包括：采用3,3'
‑
二氨基联苯胺四盐酸盐和萘或其类似物或其衍生物进行配制。
[0012]可选的，包括：
[0013]配制DAB缓冲液：过氧化氢的质量分数为0.02％～0.04％，咪唑的摩尔浓度为30mM～100mM，表面活性剂的摩尔浓度为30nM～60nM，pH为7.2～7.6；
[0014]配制DAB显色团浓缩液：将3,3'
‑
二氨基联苯胺四盐酸盐溶解制得；
[0015]配制萘或其类似物或其衍生物浓缩液：将萘或其类似物或其衍生物溶解制得；
[0016]将DAB显色团浓缩液和萘或其类似物或其衍生物浓缩液使用DAB缓冲液进行稀释，
使得获得混合液中，3,3'
‑
二氨基联苯胺四盐酸盐终浓度为0.3～5mg/mL，萘或其类似物或其衍生物的质量分数为0.02～0.04wt％。
[0017]可选的，所述表面活性剂为EDTA和/或Tween20；
[0018]配制DAB显色团浓缩液：将3,3'
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二氨基联苯胺四盐酸盐溶解于二甲基亚砜或Tris缓冲液制得；和/或
[0019]配制萘或其类似物或其衍生物浓缩液：将萘或其类似物或其衍生物溶解于N，N
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二甲基甲酰胺中制得。
[0020]所述的显色染料在免疫组织化学或免疫印迹染色中的用途。
[0021]可选的，所述免疫组织化学染色包括多重的免疫组织化学染色。
[0022]可选的，所述多重的免疫组织化学染色包括明场免疫组化染色。
[0023]本专利技术技术方案，具有如下优点：
[0024]1.本专利技术提供的显色染料，包括：3,3'
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二氨基联苯胺四盐酸盐和萘或其类似物或其衍生物；本专利技术通过研究发现，将3,3'
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二氨基联苯胺四盐酸盐和萘或其类似物或其衍生物组合，可以将DAB染料的显色颜色由棕色变为黄色，增添了一种新的颜色选择，且该颜色的灵敏度和稳定性均不差于传统的DAB染色；
[0025]进一步的，通过调节DAB染料的显色颜色由棕色变为黄色，可以避免或减少DAB染料因显色过重导致浅色染料染出的阳性信号被覆盖。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]图1是本专利技术效果例中结肠癌panCK使用对比例显色染料和实施例3显色染料的效果；图中，左图使用对比例显色染料，右图为使用实施例3显色染料效果；
[0028]图2是本专利技术效果例中肝癌PDL1使用对比例显色染料和实施例3显色染料的效果；图中，左图使用对比例显色染料，右图为使用实施例3显色染料效果；
[0029]图3是本专利技术效果例中胃癌panCK使用对比例显色染料和实施例3显色染料的效果；图中，左图使用对比例显色染料，右图为使用实施例3显色染料效果；
[0030]图4是本专利技术效果例中扁桃体CD8使用对比例显色染料和实施例3显色染料的效果；图中，左图使用对比例显色染料，右图为使用实施例3显色染料效果；
[0031]图5是本专利技术效果例中加速稳定性检测中第0天的结果；
[0032]图6是本专利技术效果例中加速稳定性检测中第7天的结果；
[0033]图7是本专利技术效果例中加速稳定性检测中第14天的结果；
[0034]图8是本专利技术效果例中工作液稳定性第0h的结果；
[0035]图9是本专利技术效果例中工作液稳定性第2h的结果；
[0036]图10是本专利技术效果例中工作液稳定性第4h的结果；
[0037]图11是本专利技术效果例中工作液稳定性第8h的结果；
[0038]图12是本专利技术效果例中工作液稳定性第24h的结果。
具体实施方式
[0039]提供下述实施例是为了更好地进一步理解本专利技术，并不局限于所述最佳实施方式，不对本专利技术的内容和保护范围构成限制，任何人在本专利技术的启示下或是将本专利技术与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本专利技术相同或相近似的产品，均落在本专利技术的保护范围之内。
[0040]实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
[0041]实施例1
[0042]本实施例提供了一种显色染料，包括：3,3'
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二氨基联苯胺四盐酸盐和萘或其类似物或其衍生物，所述萘或其类似物或其衍生物为2，3－二甲基萘，其中3,3'
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二氨基联苯胺四盐的浓度为0.3mg/mL，2，3－二甲基萘浓度为0.02wt％。
[0043]制备方法：配制DAB缓冲液：过氧化氢的质量分数为0.02％，咪唑的摩尔浓度为30mM，EDTA的摩尔浓度为30nM，pH为7.2～7.6；
[0044]配制DAB显色团浓缩液：将3,3'
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二氨基联苯胺四盐酸盐溶解于二甲基亚砜(DMSO)制得(浓度为6mg/mL)；
[0045]配制2，3－二甲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种显色染料，其特征在于，包括：3,3'
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二氨基联苯胺四盐酸盐和萘或其类似物或其衍生物。2.根据权利要求1所述的显色染料，其特征在于，萘或其类似物或其衍生物包括：3.根据权利要求1或2所述的显色染料，其特征在于，3,3'
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二氨基联苯胺四盐酸盐浓度范围为0.3～5mg/mL，萘或其类似物或其衍生物的浓度范围为质量百分比0.02～0.04wt％；可选的，还包括DAB缓冲液。4.权利要求1
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3任一项所述的显色染料的制备方法，其特征在于，包括：采用3,3'
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二氨基联苯胺四盐酸盐和萘或其类似物或其衍生物进行配制。5.根据权利要求4所述的显色染料的制备方法，其特征在于，包括：配制DAB缓冲液：过氧化氢的质量分数为0.02％～0.04％，咪唑的摩尔浓度为30mM～100mM，表面活性剂的摩尔浓度为30nM～60nM，pH为7.2～7.6；配制DAB显色团浓缩液：将3,3'
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二氨基联苯胺四盐酸盐溶解制得；配制萘...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨洋，刘港，焦磊，
申请(专利权)人：佰诺全景生物技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：