ROBO1CAR-NK92细胞复苏培养基，试剂盒及复苏培养方法技术

本发明专利技术涉及细胞生物学的技术领域，提供了一种ROBO1CAR

【技术实现步骤摘要】
ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养基，试剂盒及复苏培养方法


[0001]本专利技术涉及细胞生物学的
，具体涉及一种ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养基，试剂盒及复苏培养方法。

技术介绍

[0002]自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是机体重要的免疫细胞类型，主要分布在外周血中。NK细胞作为机体防御体系的第一道防线，不仅可以在天然免疫系统发挥其杀伤衰老细胞，病变细胞以及恶性转化的肿瘤细胞的能力，而且在免疫反应的早期可以分泌不同的细胞因子和趋化因子来调节机体获得性免疫应答反应，是机体发挥免疫效应不可或缺的重要效应细胞。NK细胞缺乏T细胞受体(TCR)，不易引起移植物抗宿主反应，是可用于同种异体病人回输治疗的重要免疫细胞类型，基于NK细胞的基因修饰细胞治疗产品具有较好的临床应用前景。
[0003]目前，NK细胞的制备方法主要是利用细胞因子以及饲养层细胞(aAPC)的激活来扩增NK细胞，但这种方法扩增的NK细胞与临床需求量仍存在较大的差距，不能满足更多同种异体临床病人的使用需求因此，研究者们开始关注使用NK细胞系(如NK
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92、YTS、KHYG
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1等)代替外周血来源的原代NK细胞进行相关研究。并且，与原代NK细胞不同的是，细胞系来源的NK细胞易于在体外扩增，易于基因修饰和改造，培养制备工艺路线相对简单，并且与原代NK细胞具有同等效力的抑瘤作用，对包括血液瘤和实体瘤肿瘤细胞均具有较强的杀伤效果。<br/>[0004]申请人的已授权专利CN109810995B公开了一种ROBO1 CAR
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NK92细胞，通过大量的体外和体内实验验证了其具有特异性杀伤ROBO1高表达实体肿瘤细胞的能力，并且毒副作用较小，安全性较高。在此基础上制备了ROBO1 CAR
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NK92细胞库，并且初步建立了细胞复苏和初步培养的方法。但原有的ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏及培养方法还存在以下缺点：经复苏的ROBO1 CAR
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NK92细胞活率偏低，仅为10％左右，细胞需培养15
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20天左右才能将细胞活率提升至80％左右，导致培养时间过长，不利于后期规模化培养制备细胞。
[0005]因此，如何提升ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏活率和缩短细胞活率恢复至80％的时间是亟需解决的。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服现有技术存在的上述问题，提供一种ROBO1CAR
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NK92细胞复苏培养基，含有该复苏培养基的试剂盒，及使用该复苏培养基的ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养方法。使用本专利技术提供的复苏培养基，以及结合本专利技术提供的ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养方法，能够快速提升ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏活率和缩短细胞活率恢复至80％的传代时间。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术第一方面提供了一种ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养基，该复苏培养基包括基础培养基和添加剂；其中，所述添加剂由细胞生长因子和B族维生素组成。
[0008]本专利技术第二方面提供了一种用于ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养的试剂盒，其包括本专利技术第一方面所述的复苏培养基。
[0009]本专利技术第三方面提供了一种ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养方法，其采用本专利技术第一方面所述的复苏培养基，或本专利技术第二方面所述的试剂盒对ROBO1 CAR
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NK92细胞进行复苏培养。
[0010]本专利技术采用上述技术方案具有以下有益效果：
[0011](1)本专利技术提供的ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养基和ROBO1CAR
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NK92细胞复苏培养方法，能够快速提升ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏活率和缩短细胞活率恢复至80％的传代时间，易于快速规模化培养；
[0012](2)本专利技术提供的ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养基，该培养基中不含动物源成分，在培养ROBO1 CAR
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NK92细胞之后，后续细胞收获分装和检测过程不会太复杂；并且避免动物源成份的引入对人体安全性产生影响。
[0013]在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
附图说明
[0014]图1所示为ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养标准流程图。
[0015]图2所示为细胞因子对ROBO1 CAR
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NK92细胞生长活性影响。
[0016]图3所示为细胞因子对ROBO1 CAR
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NK92细胞杀伤活性的影响。
[0017]图4所示为不同海藻糖浓度对ROBO1 CAR
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NK92细胞密度的影响。
[0018]图5所示为不同海藻糖浓度对ROBO1 CAR
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NK92细胞活率的影响。
[0019]图6所示为ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养的细胞密度变化图。
[0020]图7所示为ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养的细胞活率变化图。
具体实施方式
[0021]以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。
[0022]除非另有定义，本专利技术中所使用的所有科学和技术术语具有与本专利技术涉及
的技术人员通常理解的相同的含义。
[0023]本专利技术第一方面提供了一种ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养基，该复苏培养基包括基础培养基和添加剂；其中，所述添加剂由细胞生长因子和B族维生素组成。
[0024]为了更好地提升ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏活率和缩短细胞活率恢复至80％的传代时间，可以对其中一个或多个技术特征做进一步优选。
[0025]在一实例中，所述细胞生长因子包括IL
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2、IL
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15、IL
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18、IL
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21和GM
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CSF中的至少一种。
[0026]在一优选实例中，所述细胞生长因子为IL
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2。
[0027]在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加剂；其中，所述添加剂由细胞生长因子和B族维生素组成。2.根据权利要求1所述的复苏培养基，其中，所述细胞生长因子包括IL
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2、IL
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15、IL
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18、IL
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21和GM
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CSF中的至少一种，优选为IL
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2；优选地，所述B族维生素包括烟酰胺、硫胺素、核黄素、泛酸、吡哆醇、生物素、维生素B12、叶酸和生物素中的至少一种，更优选为烟酰胺；优选地，所述基础培养基为HIPP
TM
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T009。3.根据权利要求1或2所述的复苏培养基，其中，所述添加剂包括IL
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2和烟酰胺；优选地，所述IL
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2的浓度为10
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1000IU/mL；优选地，所述烟酰胺的浓度为1
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10mM。4.根据权利要求3所述的复苏培养基，其中，所述IL
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2的浓度为450
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550IU/mL；和/或，所述烟酰胺的浓度为4
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6mM。5.一种用于ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1
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4中任一项所述的复苏培养基。6.一种ROBO1 CAR
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NK92细胞复苏培养方法，其特征在于，采用权利要求1
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4中任一项所述的复苏培养基，或采用权利要求5所述的试剂盒对ROBO1CAR
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NK92细胞进行复...

【专利技术属性】
技术研发人员：李华顺，夏颖，刘刚，
申请(专利权)人：苏州因特药物研发有限公司，
类型：发明
国别省市：