血小板聚集功能检测试剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及体外检测技术领域，尤其涉及血小板聚集功能检测试剂及其应用。本发明专利技术提供的血小板聚集功能检测试剂包括纤维蛋白激活剂和ADP试剂，纤维蛋白激活剂采用新型的高纯度猪真皮胶原蛋白多肽组分Prionex，与甘氨酸联合使用显著提高纤维蛋白激活剂的稳定性，采用血小板抑制剂替罗非班，与PEG6000联合使用，提高了检测结果准确性和对抗血小板聚集药物的灵敏度；ADP试剂采用壳聚糖，提高了活性和稳定性，能够广泛应用于血小板聚集功能的临床诊断。断。

【技术实现步骤摘要】
血小板聚集功能检测试剂及其应用


[0001]本专利技术涉及体外检测
，尤其涉及血小板聚集功能检测试剂及其应用。

技术介绍

[0002]血小板是从骨髓成熟的巨核细胞胞浆裂解脱落下来的小块胞质，为圆盘型，主要功能是凝血和止血，修补破损的血管。血小板在生理止血过程中的功能活动大致可以分为两个阶段:第一阶段主要是创伤发生后，血小板迅速黏附于创伤处，并聚集成团,形成较松软的止血栓子；第二段主要是促进血凝并形成坚实的止血栓子。大量研究表明，血小板的激活和聚集是体内血栓形成的始动因素，亦是血栓形成过程中最关键的成分之一。因此，血小板聚集功能检测不仅可对血栓性疾病和出血性疾病的诊断和治疗进行评估，还可以对抗血小板聚集药物的临床效果进行初步评估，具有很好的临床指导性。
[0003]血小板聚集最重要的途径之一是ADP途径。ADP是人体内最重要的诱导血小板聚集的物质：一方面，ADP与血小板膜受体P2Y1受体结合后，与Gq蛋白耦联激活磷酯酶C，使Ca
2+
从细胞外流入细胞内，细胞内Ca
2+
浓度的升高激活了蛋白激酶C，引起血小板变形和聚集；另一方面，ADP与血小板P2Y
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膜受体结合，与Gi蛋白耦联，抑制腺苷酸环化酶AC的活化，降低了血小板中cAMP的水平，诱发血小板的聚集。血栓弹力图检测(thromboelastography，TEG)以全血作为检测样本，能够反映血液凝固动态变化(包括纤维蛋白的形成速度，溶解状态和凝状的坚固性，弹力度)的指标，并能进行连续监测，准确的描述患者的凝血概况，从而迅速判断患者是否存在凝血功能异常并分析形成原因。
[0004]氯吡格雷是一种常见的抑制血小板聚集的药物，用于预防和治疗因血小板高聚集引起的心、脑及其他动脉循环障碍疾病，其作用原理是氯吡格雷能够经肝脏细胞色素P
450
酶代谢形成活性物质，不可逆地与血小P2Y
12
膜受体结合，阻断ADP对腺苷酸环化酶AC的抑制作用，促进舒血管物质磷酸蛋白VASP的磷酸化，抑制GPIIb/Ⅲa膜受体的活化，从而抑制血小板聚集。然而，不同个体的血小板对氯吡格雷反应存在变异，约5％
‑
10％的患者用药后仍发生血栓形成，约4％
‑
30％的患者出现氯吡格雷抵抗。因此，我们需要一种精准高效的检测血小板聚集功能的方法，从而有针对性地采取个性化抗血小板治疗。
[0005]但目前国内市场上的血小板聚集功能检测试剂普遍存在稳定性较差，检测结果多假阳性等问题。为了解决这些问题，大部分厂家采取的方案都是向检测试剂中加入糖类或聚合物类冻干保护剂。此外，为了避免由于外界因素导致血小板激活的现象，有的厂家在纤维蛋白激活剂中加入了血小板抑制剂，但是并未充分考虑诊断试剂对抗血小板药物的不同反应性，因此，目前市场上仍需开发一种稳定性好、测值准确度高、灵敏性好的ADP激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种血小板聚集功能检测试剂及其应用。本专利技术提供了纤维蛋白激活剂和ADP试剂稳定性好、对抗血小板聚集药物灵敏的血小
板聚集功能检测试剂，及其在血栓弹力仪中的应用。
[0007]本专利技术提供了血小板聚集功能检测试剂，包括纤维蛋白激活剂和ADP试剂；
[0008]所述纤维蛋白激活剂中各组分的工作浓度为：巴曲酶10～100BU/mL、HFXIIIa 50～500U/mL、氯化钠0.1％～1.5％(w/v)、Prionex 0.5％～2.0％(w/v)、海藻糖0.1％～1.0％(w/v)、氨基酸0.1％～1.5％(w/v)、表面活性剂1％～10％(w/v)、血小板抑制剂0.001％～10％(w/v)、Tris 10～100mmol/L，以及防腐剂0.0001％～0.05％(w/v)；
[0009]所述ADP试剂中各组分的工作浓度为：二磷酸腺苷或二磷酸腺苷钠盐2～200μmol/L、氯化钠0.1％～1.5％(w/v)、海藻糖0.2％～2.0％(w/v)、壳聚糖0.005％～0.1％(w/v)，以及防腐剂0.005％～0.1％(w/v)。
[0010]本专利技术所述w/v为质量体积比，单位为g/mL。
[0011]具体的，本专利技术所述的工作浓度为纤维蛋白激活剂和ADP试剂在实际应用中的最佳浓度，其存储形式可以是冻干粉，也可以是1～100倍的母液，例如10倍、20倍或50倍的母液，本专利技术对此不做限定。
[0012]本专利技术提供的血小板聚集功能检测试剂稳定性好、检测结果准确度高、灵敏性好，所述血小板聚集功能检测试剂与血栓弹力仪配合使用，以全血为样本，进行相关凝血指标的检测。
[0013]本专利技术提供的检测试剂中，所述氨基酸选自甘氨酸、赖氨酸、组氨酸、缬氨酸中至少一种；
[0014]所述表面活性剂选自PEG6000、PEG8000、吐温80中至少一种；
[0015]所述血小板抑制剂选自替罗非班、阿昔单抗、依替非巴肽、替格瑞洛中至少一种；
[0016]所述二磷酸腺苷钠盐选自二磷酸腺苷钠、二磷酸腺苷二钠、二磷酸腺苷二钠盐中至少一种。
[0017]具体的，本专利技术提供的检测试剂中所述纤维蛋白激活剂中各组分的工作浓度为：巴曲酶50BU/mL、HFXIIIa 200U/mL、氯化钠0.6％(w/v)、Prionex 1.0％(w/v)、海藻糖0.6％(w/v)、氨基酸0.5％(w/v)、表面活性剂1.0％(w/v)、血小板抑制剂0.005％(w/v)、Tris 20mmol/L，以及防腐剂0.0005％(w/v)；
[0018]所述ADP试剂中各组分的工作浓度为：包括二磷酸腺苷或二磷酸腺苷钠盐150μmol/L、氯化钠0.9％(w/v)、海藻糖1.0％(w/v)、壳聚糖0.02％(w/v)，以及防腐剂0.005％(w/v)。
[0019]具体的，所述氨基酸为甘氨酸，所述表面活性剂为PEG6000，所述血小板抑制剂为替罗非班，所述防腐剂为庆大霉素。
[0020]在一些实施例中，Prionex和甘氨酸联合使用可以提高纤维蛋白激活剂的稳定性；替罗非班和PEG6000联合使用可以避免检测结果假阳性，提高对抗血小板聚集药物的灵敏度，检测所得MA值与药物浓度的相关系数达到0.996；壳聚糖可以提高ADP试剂的活性和稳定性。
[0021]本专利技术提供的检测试剂，所述纤维蛋白激活剂中各组分的工作浓度为：巴曲酶50BU/mL、HFXIIIa 200U/mL、氯化钠0.6％(w/v)、Prionex1.0％(w/v)、海藻糖0.6％(w/v)、甘氨酸0.5％(w/v)、PEG60001.0％(w/v)、替罗非班0.005％(w/v)、Tris 20mmol/L，以及庆大霉素0.0005％(w/v)；
[0022]所述ADP试剂中各组分的工作浓度为：二磷酸腺苷150μmol/L、氯化钠0.9％(w/v)、海藻糖1.0％(w/v)、壳聚糖0.0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.血小板聚集功能检测试剂，其特征在于，其包括纤维蛋白激活剂和ADP试剂；所述纤维蛋白激活剂中各组分的工作浓度为：巴曲酶10～100BU/mL、HFXIIIa 50～500U/mL、氯化钠0.1％～1.5％(w/v)、Prionex 0.5％～2.0％(w/v)、海藻糖0.1％～1.0％(w/v)、氨基酸0.1％～1.5％(w/v)、表面活性剂1％～10％(w/v)、血小板抑制剂0.001％～10％(w/v)、Tris10～100mmol/L，以及防腐剂0.0001％～0.05％(w/v)；所述ADP试剂中各组分的工作浓度为：二磷酸腺苷或二磷酸腺苷钠盐2～200μmol/L、氯化钠0.1％～1.5％(w/v)、海藻糖0.2％～2.0％(w/v)、壳聚糖0.005％～0.1％(w/v)，以及防腐剂0.005％～0.1％(w/v)。2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述氨基酸选自甘氨酸、赖氨酸、组氨酸、缬氨酸中至少一种；所述表面活性剂选自PEG6000、PEG8000、吐温80中至少一种；所述血小板抑制剂选自替罗非班、阿昔单抗、依替非巴肽、替格瑞洛中至少一种；所述二磷酸腺苷钠盐选自二磷酸腺苷钠、二磷酸腺苷二钠、二磷酸腺苷二钠盐中至少一种。3.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述纤维蛋白激活剂中各组分的工作浓度为：巴曲酶50BU/mL、HFXIIIa 200U/mL、氯化钠0.6％(w/v)、Prionex 1.0％(w/v)、海藻糖0.6％(w/v)、氨基酸0.5％(w/v)、表面活性剂1.0％(w/v)、血小板抑制剂0.005％(w/v)、Tris 20mmol/L，以及防腐剂0.0005％(w/v)；所述ADP试剂中各组分的工作浓度为：包括二磷酸腺苷或二磷酸腺苷钠盐150μmol/L、氯化钠0.9％(w/v)、海藻糖1.0％(w...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢永华，何玲，
申请(专利权)人：上海太阳生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：