一种辣椒高效遗传转化方法技术

本发明专利技术提供一种辣椒高效遗传转化方法，属于植物基因工程技术领域，本发明专利技术通过培养基、培养方法等的改进缩短了辣椒种子萌发时间，调整诱导、分化、伸长各阶段的培养基显著提高了辣椒分化效率，进而提升了转化效率，本发明专利技术用花青素基因进行了转化验证，获得了花青素高效表达的转基因植株，表明该方法可以用于辣椒转基因和基因编辑研究中的遗传转化，进一步促进辣椒转基因技术商业化。辣椒转基因技术商业化。辣椒转基因技术商业化。

【技术实现步骤摘要】
一种辣椒高效遗传转化方法


[0001]本专利技术涉及植物基因工程
，具体涉及一种辣椒高效遗传转化方法。

技术介绍

[0002]辣椒（Capsicumannuum L.）属于茄科（Solanacea）辣椒属二倍体自花授粉一年生的草本植物。原产于中南美洲，是世界上最古老的蔬菜作物之一。国际植物遗传资源委员会将其分为一年生辣椒、浆果状辣椒、分枝辣椒、中国辣椒和绒毛辣椒5个辣椒栽培种。较常规养种而言 ，转基因养种技术有着养种周期短、克服远缘杂交不亲和等优点，无疑为优良性状的导入和加快辣椒品种抗性改良提供了一条新途径，但是辣椒离体再生困难延缓了辣椒转基因技术的发展。
[0003]利用基因工程技术是改善辣椒产量和品质的重要措施之一。已有报道中，辣椒主要依靠农杆菌介导和基因枪法等构建遗传转化体系，例如，使用子叶、下胚轴、Flamingo
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bill 外植体等作为外植体，试图建立农杆菌介导辣椒遗传转化体系，但是建立的遗传转化体系不稳定，或需要特定的材料才能获得再生体系。虽然前人对辣椒遗传转化成功的案例报道较多，但是辣椒遗传转化，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种辣椒高效遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、外植体的获取：取辣椒的种子进行消毒，将消毒过后的种子置于固体MS培养基内培养，取幼苗子叶作为外植体；S2、侵染液的制备，制备含有抗性标记基因与目的基因的载体，并将载体转化根癌农杆菌，培养长出明显菌落，挑取阳性单克隆菌落，并接种在包含有抗性标记的LB液体培养基中，进行第一次振荡培养，在第二次进行接种和振荡培养，取菌液离心后，将沉淀用液体MS培养基重悬浮菌体，得到侵染液；S3、农杆菌侵染及共培养，将子叶外植体置于侵染液中浸泡，取出子叶外植体，无菌清理表面菌液后得到侵染后的外植体，将侵染后的外植体背面朝下置于共培养培养基中，暗培养2
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3天，得到共培养外植体；S4、抗性株的筛选分化，将共培养外植体移入筛选培养基内，培养2
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4周，得到抗性愈伤组织，再将所述愈伤组织转入分化培养基当中，培养2
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4周，得到不定芽愈伤组织；S5、芽株的伸长与生根，将不定芽愈伤组织转入伸长培养基，筛选培养2
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4周，得到不定芽，将不定芽转入生根培养基当中，培养2
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4周，得到完整转基因植株。2.如权利要求1所述的辣椒高效遗传转化方法，其特征在于：所述抗性标记基因为NPTⅡ。3.如权利要求1所述的辣椒高效遗传转化方法，其特征在于：所述步骤S2中载体转化根癌农杆菌于25℃
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28℃条件下培养，第一次振荡培养至菌体浓度OD 600值为0.8
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1.2，第二次振荡培养后OD 600值为0.5
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0.8，所述离心条件为温度4℃，离心转速3000rpm，离心时间5min，菌体侵染液的最终浓度为OD600＝0.1
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0.3。4.如权利要求1所述的辣椒高效遗传转化方法，其特征在于：所述步骤S3子叶于侵染液中浸染3
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10分钟，所述共培养培养基为MS基础培养基，所述共培养培养基包含以下浓度的各成分：蔗糖30g/L、玉米素6mg/L、吲哚乙酸1mg/L、乙酰丁香酮20mg/L、琼脂粉10g/L、所述培养条件为18
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25℃。5.如权利要求1所述的辣椒高效遗传转化方法，其特征在于：所述步骤S4中筛选培养基为MS基本培养基，所述筛选培养基上还包括以下浓度的各成分：ZT3
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8mg/L、吲哚乙酸0.2
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1mg/L、卡那霉素30
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100 mg/L、 头孢氨苄0.1
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0.3 g/L、蔗糖15
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40 g/L、琼脂粉6
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10 g/L；所述筛...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丽，曹乐慧，刘震，
申请(专利权)人：湖北伯远合成生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：