一种植物乳杆菌JYLP-375及其菌剂和制备预防和改善犊牛腹泻的青贮饲料的应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，具体涉及一种植物乳杆菌JYLP

【技术实现步骤摘要】
一种植物乳杆菌JYLP
‑
375及其菌剂和制备预防和改善犊牛腹泻的青贮饲料的应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种植物乳杆菌JYLP
‑
375及其菌剂和制备预防和改善犊牛腹泻的青贮饲料的应用。

技术介绍

[0002]青贮饲料是指在封闭无氧条件下通过微生物将新鲜的绿色植物发酵而成。青贮饲料保存时间长，还能保存绿色原料中的浆汁和大部分原有的营养成分，营养成分的破坏通常不超过15%，而青草自然干燥过程中养分流失高达30%左右，霉变后养分损失高达50%。研究表明，青贮饲料的贮存不仅可以保存约83%左右的干物质，还可以减少饲料中胡萝卜素和粗蛋白质等营养物质的损失，具有较高的营养价值。最好的干草最多只能维持原料的70%左右的干物质。品质优良的青贮饲料的主要营养品质与其青贮原料相接近，主要表现为青贮饲料具有良好的适口性，其反刍动物的采食量、有机物质消化率和有效能值均与青贮原料相似，青贮饲料的维生素含量和能量水平较高，营养品质较好。青贮后饲料味道清香多汁、口感适宜、营养丰富，采用青贮贮藏的方法可以为华北、西北、东北等地区冬季家畜提供优良的饲料来源。
[0003]山东地处华北平原地区，属于温带季风气候，四季分明，为农业大省，且畜牧业发达。秋粮主要为玉米、地瓜、高粱、花生等。目前秋粮结束后，玉米高粱秸秆、地瓜秧颗、花生秧等农业副产物多自然存放以备冬季犊牛饲料使用，自然存放后的农业秸秆、秧颗给养牲畜容易发生病原体微生物污染，在冬季或初春寒冷季节诱发腹泻等肠道疾病，导致肠蠕动亢进、肠内吸收困难等使其肠容物与水分被排出。犊牛是出生前六个月的小牛，肠胃系统较为柔弱，一旦出现腹泻问题，极易死亡，造成巨大损失。

技术实现思路

[0004]为了提高储备饲料的质量、降低犊牛在寒冷季节的腹泻发生率，本专利技术提供一种植物乳杆菌JYLP
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375及其菌剂和制备预防和改善犊牛腹泻的青贮饲料的应用，将秋收后的玉米高粱秸秆、地瓜秧苗等农业废弃物使用植物乳杆菌JYLP
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375进行青贮发酵处理，青贮发酵后产品可以大大增强冬季犊牛抗腹泻能力。
[0005]第一方面，本专利技术提供一种植物乳杆菌JYLP
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375，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）JYLP
‑
375已于2019年6月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18039。
[0006]第二方面，本专利技术提供一种包含植物乳杆菌JYLP
‑
375的菌剂。
[0007]进一步的，菌剂包括植物乳杆菌JYLP
‑
375冻干粉。
[0008]进一步的，植物乳杆菌JYLP
‑
375冻干粉的制备方法包括以下步骤：（1）取保藏的植物乳杆菌JYLP
‑
375在MRS平板培养基上活化，将活化后菌按照1%的接种量接种于MRS液体培养基中，在37℃条件下培养24h，获得菌液；
（2）将菌液离心，收集菌体，使用无菌生理盐水洗涤，重悬于质量分数为15%的复原脱脂乳中，获得悬浊液；（3）调整悬浊液的浓度1.0~2.0
×
10
10
cfu/mL获得菌悬液，将菌悬液冷冻干燥后，获得植物乳杆菌JYLP
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375冻干粉。
[0009]第三方面，本专利技术提供一种植物乳杆菌JYLP
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375在制备预防和改善犊牛腹泻的青贮饲料中的应用，具体为使用包含植物乳杆菌JYLP
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375的菌剂青贮玉米秸秆。
[0010]进一步的，菌剂青贮玉米秸秆的方法包括以下步骤：（1）将植物乳杆菌JYLP
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375冻干粉用井水融开配置成益生菌水溶液，配置完毕后静置30min；（2）将玉米秸秆用粉碎机进行充分粉碎，粉碎后的玉米秸秆均匀平铺于发酵槽中，向玉米秸秆中分层喷洒益生菌水溶液，每喷洒一层益生菌水溶液，快速覆盖、压实；益生菌水溶液喷洒完毕后，马上密封发酵槽，发酵时间100天。
[0011]进一步的，100克植物乳杆菌JYLP
‑
375冻干粉青贮玉米秸秆20吨。
[0012]本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的植物乳杆菌JYLP
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375在体外模拟胃肠环境下的存活率非常高，具有较强的细胞定殖能力。植物乳杆菌JYLP
‑
375用于对秋收后的玉米秸秆、地瓜秧苗等农业废弃物进行青贮发酵处理，得到的青贮饲料对改善犊牛体质、预防和改善犊牛腹泻均有良好的效果。
具体实施方式
[0013]为了使本
的人员更好地理解本专利技术中的技术方案，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0014]实施例1植物乳杆菌JYLP
‑
375的筛选、纯化和鉴定1、菌源2018年10月16日，采集自重庆市合川区渭沱镇农民自制泡菜液。
[0015]2、菌株筛选（1）对泡菜液随机取样，使用灭菌后的生理盐水进行稀释，稀释梯度为10
‑1、10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5、10
‑6、10
‑7，标号分别为1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#，待用；（2）制备MRS平板培养基：取蛋白胨 10g、牛肉粉 5g、三水醋酸钠 5g、七水磷酸氢二钾 2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰 0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁 0.2g、琼脂 15g、蒸馏水 1000mL；将上述原料混合后，自然pH，搅拌菌液后，在121℃、0.1MPa下灭菌20min，将灭菌后的培养基倒入平皿中，放凉后待用；（3）培养：将步骤
②
的1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#溶液分别使用涂布器涂布在步骤MRS平板培养基中，于37℃、厌氧条件下培养48h；（4）按照以下菌落特征挑选菌落：直径1
‑
2mm，菌落圆润、边缘整齐、微白色中间有凸起；（5）分离纯化根据步骤（4）的菌落特征挑取5个单菌落，采用划线法接种至步骤（3）
的培养基上，于37℃、厌氧条件下培养48h，挑取单菌落，置于甘油管中
‑
70℃保藏。
[0016]2、鉴定将分离纯化后单菌落送去鉴定，鉴定单位：生工生物工程（上海）股份有限公司。
[0017]（1）鉴定过程中，使用的引物如下：27F：5'
‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑
3'；1492R：5'
‑ꢀ
GGTTACCTTGTTACGACTT...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物乳杆菌JYLP
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375，其特征在于，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）JYLP
‑
375已于2019年6月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18039。2.一种包含如权利要求1所述的植物乳杆菌JYLP
‑
375的菌剂。3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，菌剂包括植物乳杆菌JYLP
‑
375冻干粉。4.根据权利要求3所述的菌剂，其特征在于，植物乳杆菌JYLP
‑
375冻干粉的制备方法包括以下步骤：（1）取保藏的植物乳杆菌JYLP
‑
375在MRS平板培养基上活化，将活化后菌按照1%的接种量接种于MRS液体培养基中，在37℃条件下培养24h，获得菌液；（2）将菌液离心，收集菌体，使用无菌生理盐水洗涤，重悬于质量分数为15%的复原脱脂乳中，获得悬浊液；（3）调整悬浊液的浓度1.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩小龙，杨茁萌，刘连军，梁萌，周全州，潘玉林，潘仕城，朱英莲，
申请(专利权)人：山东中科嘉亿生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：