本发明专利技术涉及一种黄连中生物碱类成分的含量测定方法，属于中药质量控制领域。黄连是中医常用的清热燥湿药，其中的生物碱类成分具有多种药理活性。本发明专利技术利用双三元液相色谱串联电雾式检测器(Charged aerosol detector，CAD)对黄连提取物进行检测，采用任意一个生物碱标准品可以同时对黄连中的多种生物碱类成分进行定量，方法简单可靠，准确度高，对黄连中已知和未知生物碱类成分的量效关系研究以及黄连药材的质量控制具有重要的参考意义。黄连药材的质量控制具有重要的参考意义。黄连药材的质量控制具有重要的参考意义。
【技术实现步骤摘要】
一种黄连中生物碱类成分的含量测定方法
[0001]本专利技术涉及一种黄连中生物碱类成分的含量测定方法，属于中药质量控制领域。
技术介绍
[0002]黄连是毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连CoptisdeltoideaC.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptisteeta Wall.的干燥根茎，始载于《神农本草经》，具有清热燥湿、泻火解毒的功效，中医常用于治疗湿热痞满、呕吐吞酸、高热神昏、心火亢盛等疾病。生物碱类成分是黄连发挥药效的主要成分，其含量测定研究目前主要使用高效液相色谱法和薄层色谱法[吴晓青等，世界科学技术
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中医药现代化，2019,21(08):1642
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1648]，定量过程依赖于标准品的分析和标准曲线的绘制。中国药典从2010版开始采用一测多评法对黄连中的四种生物碱类成分进行含量测定，使用标准品建立其中一个指标成分与其余待测成分之间的函数关系，在缺乏待测成分标准品的情况下通过计算获得待测成分的含量。然而对于未知成分或难以获得标准品的成分，无法使用标准品来建立其与指标成分之间的函数关系，因此仍然缺乏有效的含量测定手段。
[0003]电雾式检测器(Charged aerosol detector,CAD)是一种新型原理的液相色谱检测器，洗脱液经雾化后形成颗粒，经过漂移管干燥后与带电氮气碰撞，使得目标化合物带上正电荷，最后通过检测电荷量来对样品进行检测，其响应不依赖于化合物的结构与性质，具有灵敏度高、重复性好等特点，近年来被广泛应用于中药有效成分的含量测定中[袁明昊等，中成药，2021，43(07)：1852
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1857]。然而，虽然CAD的检测响应值与化合物的结构和性质无关，其分析物颗粒的产生却与样品中有机相的比例呈正相关，有机相比例越高，样品雾化效率越高，越容易形成分析物颗粒。高效液相色谱通常使用梯度洗脱程序进行分析，进入CAD的洗脱液有机相的比例在不断变化，导致CAD的雾化效率无法保持一致，影响CAD的定量准确性。CAD与双三元高效液相色谱串联可以有效避免这一问题，通过右泵和左泵的配合使用，使得进入CAD的洗脱液有机相浓度保持恒定，维持CAD的喷雾稳定性，保证CAD的定量准确性。
[0004]本专利技术基于双三元液相色谱串联CAD技术，建立了黄连中生物碱类成分的含量测定方法，采用任意一个标准品可以同时对黄连中的多种成分进行定量，包括未知成分和没有标准品的成分，扩大了可以被定量的色谱峰的范围，为黄连的质量控制和量效关系研究提供参考依据。
技术实现思路
[0005]针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种黄连中生物碱类成分的含量测定方法。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种黄连中生物碱类成分的含量测定方法，其特征在于包括以下步骤：
[0007](1)供试品溶液的制备：精密称取黄连样品粉末1.0～10.0g，加入20mL体积浓度为
10％～100％的甲醇或乙醇溶液(含体积浓度0.1％～1％甲酸)，超声提取20～60min，离心，取上清液，既得；
[0008](2)标准品溶液的制备：精密称取0.1～100mg木兰花碱、原阿片碱、四氢巴马汀、表小檗碱、四氢小檗碱、小檗红碱、小檗碱7个生物碱标准品中的任意一个，用1～10mL体积浓度10％～100％的甲醇/水溶液(含体积浓度0.1％～1％甲酸)溶解后，转移至容量瓶中，用体积浓度10％～100％的甲醇/水溶液(含体积浓度0.1％～1％甲酸)定容，既得第一个浓度点；用移液管精密量取第一个浓度点样品1～5mL至第二个容量瓶中，用体积浓度10％～100％的甲醇/水溶液(含体积浓度0.1％～1％甲酸)定容，既得第二个浓度点；再用移液管精密量取第二个浓度点样品1～5mL至第三个容量瓶中，用体积浓度10％～100％的甲醇/水溶液(含体积浓度0.1％～1％甲酸)定容，既得第三个浓度点，依次逐级稀释直至得到所有浓度点样品。
[0009](3)标准曲线的绘制：采用双三元液相色谱串联电雾式检测器(Charged aerosol detector，CAD)对一系列2个以上(优选5个以上)不同体积浓度的标准品溶液进行分析，色谱柱为C18 HCE、XSELECT CSH C18、CORTECS C18+中的一种，流动相A为体积浓度0.1％～1.0％的甲酸/水，流动相B为体积浓度0.1％～1.0％的甲酸/乙腈，右泵(分析泵)梯度为0～5min，10％B，5～30min，10％～30％B，左泵(补偿泵)梯度为0～5min，90％B，5～30min，90％～70％B，右泵和左泵总是保持时间相同有机相比例相反，两泵的洗脱液在柱后混合，保证进入CAD的样品有机相比例恒定为50％。电雾式检测器的雾化温度为25℃～45℃。分别以标准品体积浓度(mg/mL)的对数值(lg)和峰面积(pA*min)的对数值(lg)为横纵坐标绘制它们的标准曲线；
[0010](4)黄连样品中生物碱类成分的定量：采用与步骤(3)中相同的方法分析黄连供试品溶液，将得到的色谱峰面积带入步骤(3)中获得的标准曲线中进行计算，获得体积浓度对数值(lg)，进一步计算获得其质量浓度；本专利技术利用双三元液相色谱串联电雾式检测器(Charged aerosol detector，CAD)对黄连提取物进行检测，采用任意一个生物碱标准品可以同时对黄连中的多种生物碱类成分进行定量，方法简单可靠，准确度高，对黄连中已知和未知生物碱类成分的量效关系研究以及黄连药材的质量控制具有重要的参考意义。
[0011]本专利技术的优点如下：
[0012]提供了一种新的黄连中生物碱类成分的含量测定方法，该方法使用双三元液相色谱串联CAD进行检测，采用任意一个生物碱标准品可以同时对多种生物碱类成分进行定量，包括黄连中的未知成分和难以获得标准品的成分。
[0013]该方法简单可靠，准确度偏差可控制在50％以内，回收率可控制在80％
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150％。
附图说明
[0014]附图1.黄连提取液CAD分析色谱图。
具体实施方式
[0015]现结合实施例对本专利技术做进一步说明，下述实施例仅限于说明本专利技术，而非对本专利技术的限定。
[0016]实施例一：方法学验证
[0017](1)标准品溶液的配制：分别精确称取木兰花碱2.99mg、原阿片碱2.99mg、四氢巴马汀3.00mg、表小檗碱3.00mg、四氢小檗碱3.01mg、小檗红碱2.99mg、小檗碱3.02mg，分别加入1mL20％甲醇(含0.5％甲酸)，超声使溶解。将溶解后的7个样品分别转移至10mL容量瓶中，分别用20％甲醇(含0.5％甲酸)(体积浓度，下同)定容至刻度，既得浓度1样品。分别用移液管精密量取1mL浓度1样品于2mL容量瓶中，用10％甲醇(含0.5％FA)定容至刻度，既得浓度2样品；分别用移液管精密量取1mL浓度2样品于5mL容量瓶中，用10％甲醇(含0.5％FA)定容至刻度本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种黄连中生物碱类成分的含量测定方法，其特征在于包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：称取黄连样品粉末，加入溶剂超声提取后离心，取上清液，既得；(2)标准品溶液的制备：分别称取木兰花碱、原阿片碱、四氢巴马汀、表小檗碱、四氢小檗碱、小檗红碱、小檗碱7个生物碱标准品中的任意一个或二个以上，分别加入溶剂溶解后定容；(3)标准曲线的绘制：采用双三元液相色谱串联电雾式检测器(Charged aerosol detector，CAD)对一系列2个以上(优选5个以上)不同体积浓度的不同标准品溶液进行分析，分别以标准品体积浓度(mg/mL)的对数值(lg)和峰面积(pA*min)的对数值(lg)为横纵坐标绘制不同标准品的标准曲线；(4)黄连样品中生物碱类成分的定量：采用与步骤(3)中相同的条件用双三元液相色谱串联电雾式检测器(Charged aerosol detector，CAD)分析黄连供试品溶液，将得到的对应标准品的色谱峰面积带入步骤(3)中获得的对应标准品的标准曲线中进行计算，获得体积浓度对数值(lg)，进一步计算获得其质量浓度。2.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，步骤(1)中供试品溶液的制备方法为：称取黄连样品粉末1.0～10.0g，加入20mL体积浓度为10％～100％的甲醇和/或乙醇溶液(其中含体积浓度0.1％～1％甲酸)，超声提取20～60min，离心，取上清液，既得。3.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述的标准品溶液的制备方法为：分别称取0.1～100mg木兰花碱、原阿片碱、四氢巴马汀、表小檗碱、四氢小檗碱、小檗红碱...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，余文怡，沈爱金，刘艳芳，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：
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