miRNA剂型的骨关节炎药物制剂及其制备方法技术

本发明专利技术属于骨关节炎治疗技术领域，具体提供了一种miRNA剂型的骨关节炎药物制剂及其制备方法。该药物制剂包括miRNA和脂质纳米颗粒，通过微流控芯片制备直径在10

【技术实现步骤摘要】
miRNA剂型的骨关节炎药物制剂及其制备方法


[0001]本专利技术属于骨关节炎治疗
，具体提供了一种miRNA剂型的骨关节炎药物制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]骨关节炎(OA)是一种以慢性炎症、进行性关节软骨破坏和软骨下骨硬化为主要特征的慢性关节疾病。目前，早期和中期OA的治疗策略是缓解关节疼痛和关节内注射，晚期OA的治疗策略是关节置换手术。早中期骨关节炎最常用的方法为药物治疗，通过口服给药，药物经过全身循环很难到达病变区域，不但对病情治疗效果欠佳，还可能产生不必要的副作用。关节内注射给药，药物能够直达病变区域，但现有的药物主要是发挥消炎和镇痛作用，对软骨修复作用微乎其微。
[0003]近年来，通过将微小核糖核酸(microRNA，miRNA)应用于疾病治疗己引起广泛的关注。miRNA是一种小的内源性非编码RNA分子，大约由21
‑
25个核苷酸组成。这些小的miRNA通常靶向一个或者多个miRNA，通过翻译水平的抑制或断裂靶标miRNAs而调节基因的表达，从而实现从基因水平上治疗疾病。比如，miRNA可以通过调节软骨细胞内与软骨基质合成相关基因的表达，进而使细胞外基质的合成增加并产生分解抑制，可以有效的加快软骨损伤的恢复。但miRNA在细胞外作用极其脆弱，且难以进入细胞内发挥生物学效应。因此，开发新型miRNA药物制剂用于骨关节炎治疗成为领域内的研究热点。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于针对现有骨关节炎药物存在的问题，提供一种miRNA剂型的骨关节炎药物制剂及其制备方法，所述miRNA剂型的骨关节炎药物可以直接关节注射给药，在消炎和镇痛的同时，实现软骨修复。
[0005]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种miRNA剂型的骨关节炎药物制剂，所述制剂由miRNA和脂质纳米颗粒(LNP)组成。
[0006]miRNA为miR
‑
200c
‑
3p，序列为UAAUACUGCCGGGUAAUGAUGGA。
[0007]miRNA剂型的骨关节炎药物制剂中miRNA用量为100～2800μg/ml。
[0008]LNP是由二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、胆固醇(cholesterol)和1,2
‑
二肉豆蔻酰
‑
rac
‑
甘油
‑3‑
甲氧基聚乙二醇2000(DMG
‑
PEG2000)或((4
‑
羟基丁基)氮杂二基)双(己烷
‑
6,1
‑
二基)双(2
‑
己基癸酸酯)(ALC
‑
0315)、胆固醇和二硬脂酰基基磷脂乙醇胺
‑
聚乙二醇组成的混合物。
[0009]miRNA剂型的骨关节炎药物为直径介于20
‑
600纳米的颗粒组合物。
[0010]药物制剂作用靶点为ZEB2基因。miRNA剂型的骨关节炎药物用于预防或改善骨关节炎。
[0011]miRNA剂型的骨关节炎药物的施用方式包括皮下、肌肉、静脉和关节腔内注射。
[0012]本专利技术的另一方面：
[0013]miRNA剂型的骨关节炎药物制剂是采用微流控设备制备得到的。制备方法包括以下步骤：
[0014](1)将脂质体原料溶解于无水乙醇，形成溶液A；
[0015](2)将miRNA溶于柠檬酸缓冲液，形成溶液B；
[0016](3)使用微流体纳米药物生产装置将所述溶液A、溶液B混合后，使用PBS缓冲液透析，过滤膜除菌后即得miRNA剂型的骨关节炎药物。
[0017]本专利技术相比现有技术的有益效果为：
[0018]1.miRNA类药物可以从基因水平上抑制炎症，使细胞外基质的合成增加并产生分解抑制，可以有效的加快软骨损伤的恢复。克服现有的药物主要是发挥消炎和镇痛作用，对软骨修复作用微乎其微的弊端。
[0019]2.通过脂质纳米粒包裹miRNA方法克服了miRNA在细胞外及其脆弱，且难以进入细胞内发挥生物学作用的弊端。
[0020]3.通过微流控技术生产miRNA剂型的骨关节炎药物，可以有效降低生产成本；且其制备的纳米粒理化性质(包括粒径、电势、包封率、稳定性)较为均一、生产和纯化过程易实现标准化操作，进一步节省了时间和经济成本。
[0021]4.miRNA剂型的骨关节炎药物可减少LPS刺激后小鼠ADTC5细胞TNF
‑
α、IL
‑
6、IL
‑
1β、MCP
‑
1蛋白的表达水平，增强细胞活力，同时拮抗细胞凋亡，降低MMP3、MMP13、ADAMTS
‑
4的表达和提高Collagen II的表达。
附图说明：
[0022]图1为微流控通道水相和乙醇相流速比对制备miRNA剂型的骨关节炎药物粒径(Z
‑
AVE)与分散性(PDI)影响图。
[0023]图2为微流控通道水相和乙醇总流速对制备miRNA剂型的骨关节炎药物粒径(Z
‑
AVE)与分散性(PDI)影响图。
[0024]图3为不同miR
‑
200c
‑
3p浓度对于miRNA剂型的骨关节炎药物中miR
‑
200c
‑
3p包封率的影响。
[0025]图4药物制剂的电镜图。
[0026]图5miRNA剂型的骨关节炎药物在生理环境下，随时间变化，粒径与分散性变化图。
[0027]图6LPS对ATDC5细胞活性及miR
‑
200c
‑
3p表达水平的影响图。其中，A.采用CCK
‑
8检测LPS处理后细胞活性，B.LPS处理后miR
‑
200c
‑
3p的表达水平。其中与Control比较，***p<0.001。
[0028]图7RT
‑
PCR检测LPS处理ATDC5细胞，Lipo
‑
miR
‑
200c
‑
3p转染miR
‑
200c
‑
3p后，miR
‑
200c
‑
3p的表达水平，***p<0.001。
[0029]图8Lipo
‑
miR
‑
200c
‑
3p传递miR
‑
200c
‑
3p后抑制LPS诱导ATDC5细胞的活力损伤图。
[0030]图9Lipo
‑
miR
‑
200c
‑
3p传递miR
‑
200c
‑
3p对于ATDC5细胞炎症因子本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种miRNA剂型的骨关节炎药物制剂，其特征在于，所述药物制剂由miRNA和脂质纳米颗粒组成；miRNA为miR
‑
200c
‑
3p，序列号为UAAUACUGCCGGGUAAUGAUGGA。2.如权利要求1所述的miRNA剂型的骨关节炎药物制剂，其特征在于，所述miRNA作为活性成分在骨关节药物制剂中的浓度为100～2800μg/ml。3.如权利要求1所述的miRNA剂型的骨关节炎药物制剂，其特征在于，所述脂质纳米粒是由二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、胆固醇(cholesterol)和1,2
‑
二肉豆蔻酰
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rac
‑
甘油
‑3‑
甲氧基聚乙二醇2000(DMG
‑
PEG2000)或
‑
((4
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羟基丁基)氮杂二基)双(己烷
‑
6,1
‑
二基)双(2
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：郑栋，吕松伟，贾斌，
申请(专利权)人：常州大学，
类型：发明
国别省市：