一种产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的养殖用培养基质、养殖方法和抗菌肽提取方法技术

本发明专利技术属于抗菌肽生产技术领域，涉及一种产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的养殖用培养基质、养殖方法和抗菌肽提取方法。本发明专利技术提供了一种产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的养殖用培养基质，所述培养基质包括麦麸，所述培养基质的含水率为65～70％。本发明专利技术所述培养基质能够实现黑水虻幼虫快速有效地生产高活性抗菌肽。实现黑水虻幼虫快速有效地生产高活性抗菌肽。实现黑水虻幼虫快速有效地生产高活性抗菌肽。

【技术实现步骤摘要】
一种产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的养殖用培养基质、养殖方法和抗菌肽提取方法


[0001]本专利技术属于抗菌肽生产
，具体涉及一种产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的养殖用培养基质、养殖方法和抗菌肽提取方法。

技术介绍

[0002]滥用抗生素导致病原菌抗药性增强，甚至催生“超级致病菌”，从而减弱抗生素使用效果。目前，抗生素耐药性与安全性已被世界卫生组织列为全球公共卫生的威胁之一。“饲料禁止使用抗生素”的形势已经非常明朗，尤其是在抗生素越来越被严格限制使用的背景下，寻找绿色安全高效的抗生素替代品成为行业迫切所需。
[0003]昆虫源抗菌肽因具有良好的抑菌活性、稳定性及安全性，被认为是潜在的抗生素替代品之一。作为昆虫宿主防御机制的代表,抗菌肽广泛存在于许多昆虫体内，是昆虫宿主天然免疫系统的主要构成成分。昆虫抗菌肽主要是由小分子次级代谢物以及小蛋白和肽组成，对细菌、真菌及病毒等病原体都有着防御机制，具有较大的“替抗”潜力。
[0004]首个昆虫抗菌肽发现于1981年，系从家蚕滞育蛹中鉴定出的诱导抑菌因子，被命名为天蚕素。目前在抗菌肽数据库中(https://aps.unmc.edu/AP/)，报道的昆虫抗菌肽共有约325种，根据氨基酸特性可以分为四大类：(1)含半胱氨酸的抗菌肽；(2)α
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螺旋结构抗菌肽；(3)含脯氨酸的抗菌肽；(4)含甘氨酸的抗菌肽。
[0005]在众多昆虫中，黑水虻幼虫含有50多种抗菌肽基因，是迄今为止在昆虫中发现的最大的抗菌肽家族，同时黑水虻被人们发现其具有将废弃物转化为自身资源的能力，能够在多致病菌环境下生存并产生相对应的抗菌物质。黑水虻抗菌肽在不同基质下有不同种类的表达，这为黑水虻养殖且产高活性抗菌肽提供了科学依据。但目前仍缺乏一种产高活性抗菌肽的黑水虻培养方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的养殖用培养基质、养殖方法和抗菌肽提取方法。本专利技术所述培养基质能够实现黑水虻幼虫快速有效地生产高活性抗菌肽。
[0007]本专利技术提供了一种产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的养殖用培养基质，所述培养基质包括麦麸，所述培养基质的含水率为65～70％。
[0008]本专利技术还提供了上述技术方案所述培养基质在养殖产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫中的应用。
[0009]本专利技术还提供了一种基于上述技术方案所述培养基质养殖产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的方法，包括以下步骤：
[0010]将3日龄黑水虻幼虫置于上述技术方案所述培养基质中进行养殖，在养殖过程中，每日翻料。
[0011]优选的是，所述养殖的密度为1头/cm3。
[0012]本专利技术还提供了一种黑水虻抗菌肽的提取方法，包括以下步骤：
[0013]通过过筛收集上述技术方案所述方法养殖的黑水虻幼虫，在幼虫体内注入菌液进行抗菌肽的诱导，诱导后饥饿处理24h，采用血淋巴收集法提取黑水虻抗菌肽。
[0014]优选的是，当黑水虻幼虫为8日龄时，进行所述收集的操作。
[0015]优选的是，所述过筛为使用8目筛网将幼虫与培养基质分离。
[0016]优选的是，所述菌液包括金黄色葡萄球菌菌液，所述金黄色葡萄球菌菌液中金黄色葡萄球菌的浓度为106～107cfu/μL，所述注入的菌液的量为10μL/只。
[0017]本专利技术还提供了上述技术方案所述提取方法提取得到的黑水虻抗菌肽。
[0018]本专利技术还提供了上述技术方案所述抗菌肽在制备抑制金黄色葡萄球菌的菌剂中的应用。
[0019]本专利技术提供了一种产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的养殖用培养基质。本专利技术所述培养基质能够实现黑水虻幼虫快速有效地生产高活性抗菌肽。试验结果表明，在70％含水量的纯麦麸基质下，以1头/cm3的虫密度，不调整pH，不添加盐和油进行养殖黑水虻幼虫，此条件下能够获得生产高活性抗菌肽幼虫。基于本专利技术培养基质获得的抗菌肽能够破坏金黄色葡萄球菌的细胞膜结构，使细胞膜透过性发生改变；破坏金黄色葡萄球菌细胞的完整性，导致细胞表面形态的变化；引起金黄色葡萄球菌的细胞裂解及胞质流出。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为本专利技术提供的不同养殖条件下抑菌圈直径结果图；
[0022]图2为本专利技术提供的金黄色葡萄球菌光学显微镜及荧光显微镜照片；
[0023]图3为本专利技术提供的金黄色葡萄球菌扫描电镜和透射电镜照片。
具体实施方式
[0024]本专利技术提供了一种产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的养殖用培养基质，所述培养基质包括麦麸，所述培养基质的含水率为65～70％。在本专利技术中，所述含水率更优选为70％。在本专利技术中，所述麦麸优选包括片状粗麦麸。在本专利技术中，所述麦麸的粒径优选为微米到毫米级别。本专利技术所述培养基质用于黑水虻的养殖，可以相对提高黑水虻抗菌肽的抑菌能力。
[0025]本专利技术还提供了上述技术方案所述培养基质在养殖产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫中的应用。
[0026]本专利技术还提供了一种基于上述技术方案所述培养基质养殖产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的方法，包括以下步骤：
[0027]将3日龄黑水虻幼虫置于上述技术方案所述培养基质中进行养殖，在养殖过程中，每日翻料。
[0028]在本专利技术中，所述3日龄黑水虻优选通过取黑水虻卵进行孵化获得。在本专利技术中，
所述孵化的温度优选为25～30℃。本专利技术优选将黑水虻置于黑水虻饲料上进行孵化。在本专利技术中，所述养殖的密度优选为1头/cm3。在本专利技术中，所述养殖的温度优选为25～30℃。
[0029]本专利技术还提供了一种黑水虻抗菌肽的提取方法，包括以下步骤：
[0030]通过过筛收集上述技术方案所述方法养殖的黑水虻幼虫，在幼虫体内注入菌液进行抗菌肽的诱导，诱导后饥饿处理24h，采用血淋巴收集法提取黑水虻抗菌肽。在本专利技术中，优选当黑水虻幼虫为8日龄时，进行所述收集的操作。在本专利技术中，所述过筛优选为使用8目筛网将幼虫与培养基质分离。
[0031]在本专利技术中，所述菌液优选包括金黄色葡萄球菌菌液，所述金黄色葡萄球菌菌液中金黄色葡萄球菌的浓度优选为106～107cfu/μL，更优选106cfu/μL，所述注入的菌液的量优选为10μL/只。
[0032]本专利技术还提供了上述技术方案所述提取方法提取得到的黑水虻抗菌肽。
[0033]本专利技术还提供了上述技术方案所述抗菌肽在制备抑制金黄色葡萄球菌的菌剂中的应用。本专利技术所述抗菌肽能够用于金黄色葡萄球菌所致疾病的治疗。在本专利技术中，所述治疗方法优选包括将本专利技术抗菌肽作用于金黄色葡萄球菌所致病患。本专利技术所述抗菌肽能够破坏金黄色葡萄球菌的细胞膜结构，使细胞膜透过性发生改变；破坏金黄色葡萄球菌细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的养殖用培养基质，其特征在于，所述培养基质包括麦麸，所述培养基质的含水率为65～70％。2.权利要求1所述培养基质在养殖产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫中的应用。3.一种基于权利要求1所述培养基质养殖产高活性抗菌肽的黑水虻幼虫的方法，包括以下步骤：将3日龄黑水虻幼虫置于权利要求1所述培养基质中进行养殖，在养殖过程中，每日翻料。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述养殖的密度为1头/cm3。5.一种黑水虻抗菌肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：通过过筛收集权利要求3或4所述方法养殖的黑水虻幼虫，在幼虫体内注入菌液进行抗菌肽的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王飞，王晓芳，王会，章启慧，陈玉梁，郑朝中，王雷雨，吴佳，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：