一种生物组织透明化方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物组织样本处理技术领域，具体涉及一种生物组织透明化方法及其应用。本发明专利技术利用阴离子表面活性剂结合电泳对生物组织进行预脱脂能够深入生物组织内部除脂，实现生物细胞膜磷脂双分子层微打孔，从而能够对高脂肪含量的生物组织进行除脂。本发明专利技术经过预脱脂、目标细胞/组织/蛋白标记、脱色、梯度脱脂、脱水和折射率匹配的步骤能够将高脂肪含量的生物组织进行透明化处理，得到具有较高透明度的特异性标记的生物组织样品。的特异性标记的生物组织样品。的特异性标记的生物组织样品。

【技术实现步骤摘要】
一种生物组织透明化方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物组织样本处理
，具体涉及一种生物组织透明化方法及其应用。

技术介绍

[0002]组织透明技术是指使用一种试剂或几种试剂组成的混合液，通过浸泡，电泳或灌注等处理方式，使大块组织或完整器官达到视觉下透明或光学仪器下内部结构可见的效果。鉴于蛋白质是绝大多数生物医学研究的目标分子，所以脱脂处理是实现透明化的关键步骤，适当脱脂可以更好地实现样品透明化。同时脱脂利于后续抗体孵育的进行，使组织器官更深处充分结合到抗体，实现组织器官各部位充分标记抗体的目的。
[0003]目前透明化方法主要包括CLARITY、CUBIC、iDISCO和FRUIT。然而由于人脑颞上回组织致密，脂肪含量高(人脑中脂肪占固体物质的60％左右)，血管有内源荧光，人脑组织经过现有的透明化方法处理后的透明度较低。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供了一种生物组织透明化方法及其应用，人脑组织按照本专利技术提供的生物组织透明化方法处理后能够达到较高的透明度。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种生物组织透明化方法，包括以下步骤：
[0006]将生物组织浸泡于阴离子表面活性剂溶液中在电场条件下进行预脱脂，得到预脱脂生物组织；
[0007]对所述预脱脂生物组织进行标记后依次在第一氨水、氢氧化钾和过氧化氢的混合溶液、第二氨水、N,N,N,N
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四(2
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羟丙基)乙二胺水溶液中浸泡进行脱色处理，得到脱色生物组织；
[0008]将所述脱色生物组织分别于不同浓度的脱脂液中浸泡进行梯度脱脂，得到梯度脱脂的生物组织；所述脱脂液为叔丁醇和N,N,N',N'
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四(2
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羟丙基)乙二胺的水溶液；
[0009]将所述梯度脱脂的生物组织于脱水液中浸泡进行脱水，得到脱水生物组织；所述脱水液为叔丁醇和四乙二胺的水溶液；
[0010]将所述脱水生物组织进行折射率匹配，得到透明生物组织。
[0011]优选的，所述阴离子表面活性剂溶液中阴离子表面活性剂包括十二烷基硫酸钠、烷基磺酸钠、烷基芳基磺酸钠或仲烷基硫酸钠。
[0012]优选的，所述电场的电压为0.5～20V，所述电场方向间隔10～60s进行反转；
[0013]所述预脱脂的时间为1～500h。
[0014]优选的，所述第一氨水的质量浓度为1～20％；
[0015]所述氢氧化钾和过氧化氢的混合溶液中氢氧化钾的质量浓度为0.01～5％；
[0016]所述氢氧化钾和过氧化氢的混合溶液中过氧化氢的质量浓度为0.1～10％；
[0017]所述第二氨水的质量浓度为1～20％；
[0018]所述N,N,N',N'
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四(2
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羟丙基)乙二胺水溶液的质量浓度为5～50％。
[0019]优选的，在第一氨水中浸泡的时间为4～24h，在氢氧化钾和过氧化氢的混合溶液中浸泡的时间为1～100min，在第二氨水中浸泡的时间为4～24h，在N,N,N',N'
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四(2
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羟丙基)乙二胺水溶液中浸泡的时间为1～500h。
[0020]优选的，所述脱脂液中N,N,N,N
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四(2
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羟丙基)乙二胺的质量浓度为1～40％，所述脱脂液中叔丁醇的质量浓度为5～90％。
[0021]优选的，所述脱水液中叔丁醇的质量浓度为5～90％，所述脱水液中四乙二胺的质量浓度为1～40％。
[0022]优选的，所述脱水的时间为1～10天。
[0023]优选的，所述折射率匹配为将所述脱水生物组织于折射率匹配液中浸泡，所述折射率匹配液包括体积浓度为40～70％的苯甲酸苄酯、体积浓度为1～10％的双酚A乙氧基化物二丙烯酸酯、体积浓度为1～10％的四乙二胺和质量浓度为1～10％的紫外引发剂；
[0024]所述浸泡的时间为1～10天。
[0025]本专利技术还提供了上述技术方案所述生物组织透明化方法在脂肪含量占固体物质50％以上的生物组织透明处理中的应用。
[0026]本专利技术提供了一种生物组织透明化方法，包括以下步骤：将生物组织浸泡于阴离子表面活性剂溶液中在电场条件下进行预脱脂，得到预脱脂生物组织；对所述预脱脂生物组织进行标记后依次在第一氨水、氢氧化钾和过氧化氢的混合溶液、第二氨水、N,N,N,N
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四(2
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羟丙基)乙二胺水溶液中浸泡进行脱色处理，得到脱色生物组织；将所述脱色生物组织分别于不同浓度的脱脂液中浸泡进行梯度脱脂，得到梯度脱脂的生物组织；所述脱脂液为叔丁醇和N,N,N',N'
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四(2
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羟丙基)乙二胺的水溶液；将所述梯度脱脂的生物组织于脱水液中浸泡进行脱水，得到脱水生物组织；所述脱水液为叔丁醇和四乙二胺的水溶液；将所述脱水生物组织进行折射率匹配，得到透明生物组织。本专利技术利用阴离子表面活性剂结合电泳对生物组织进行预脱脂能够深入生物组织内部除脂，实现生物细胞膜磷脂双分子层微打孔，从而能够对高脂肪含量的生物组织进行除脂。本专利技术经过预脱脂、特异性标记、脱色、梯度脱脂、脱水和折射率匹配的处理，能够将高脂肪含量的生物组织进行透明化处理，同时提高高脂肪含量的生物组织特异性标记物标记效率，且得到具有较高透明度的生物组织样品，以实现成像。
附图说明
[0027]图1为实施例1中预脱脂前后人脑组织的实物图，其中a为人脑组织进行预脱脂前的实物图，b为人脑组织进行预脱脂后的实物图；
[0028]图2为实施例1中Abeta斑块染色后的人脑组织；
[0029]图3为实施例1制备得到的透明化人脑组织的实物图；
[0030]图4为实施例1制备得到的透明化人脑组织成像后Abeta斑块与小胶质细胞的微观形态图，其中a中的亮块为在200μm比例尺下的Abeta斑块，b中黄色的亮点为在200μm比例尺下的小胶质细胞，c为Abeta斑块与小胶质细胞共标记通道融合图，d中的亮块为在100μm比例尺下的Abeta斑块，e中黄色的亮点为在100μm比例尺下的小胶质细胞。
具体实施方式
[0031]本专利技术提供了一种生物组织透明化方法，包括以下步骤：
[0032]将生物组织浸泡于阴离子表面活性剂溶液中在电场条件下进行预脱脂，得到预脱脂生物组织；
[0033]对所述预脱脂生物组织进行标记后依次在第一氨水、氢氧化钾和过氧化氢的混合溶液、第二氨水、N,N,N,N
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四(2
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羟丙基)乙二胺水溶液中浸泡进行脱色处理，得到脱色生物组织；
[0034]将所述脱色生物组织分别于不同浓度的脱脂液中浸泡进行梯度脱脂，得到梯度脱脂的生物组织；所述脱脂液为叔丁醇和N,N,N',N'
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四(2
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羟丙基)乙二胺的水溶液；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物组织透明化方法，包括以下步骤：将生物组织浸泡于阴离子表面活性剂溶液中在电场条件下进行预脱脂，得到预脱脂生物组织；对所述预脱脂生物组织进行标记后依次在第一氨水、氢氧化钾和过氧化氢的混合溶液、第二氨水、N,N,N,N
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四(2
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羟丙基)乙二胺水溶液中浸泡进行脱色处理，得到脱色生物组织；将所述脱色生物组织分别于不同浓度的脱脂液中浸泡进行梯度脱脂，得到梯度脱脂的生物组织；所述脱脂液为叔丁醇和N,N,N',N'
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四(2
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羟丙基)乙二胺的水溶液；将所述梯度脱脂的生物组织于脱水液中浸泡进行脱水，得到脱水生物组织；所述脱水液为叔丁醇和四乙二胺的水溶液；将所述脱水生物组织进行折射率匹配，得到透明生物组织。2.根据权利要求1所述生物组织透明化方法，其特征在于，所述阴离子表面活性剂溶液中阴离子表面活性剂包括十二烷基硫酸钠、烷基磺酸钠、烷基芳基磺酸钠或仲烷基硫酸钠。3.根据权利要求1或2所述生物组织透明化方法，其特征在于，所述电场的电压为0.5～20V，所述电场方向间隔10～60s进行反转；所述预脱脂的时间为1～500h。4.根据权利要求1所述生物组织透明化方法，其特征在于，所述第一氨水的质量浓度为1～20％；所述氢氧化钾和过氧化氢的混合溶液中氢氧化钾的质量浓度为0.01～5％；所述氢氧化钾和过氧化氢的混合溶液中过氧化氢的质量浓度为0.1～10％；所述第二氨水的质量浓度为1～20％；所述N,N,N',N...

【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，
申请(专利权)人：王晓良，
类型：发明
国别省市：