共包封苦参碱衍生物A6和DOX长循环脂质体的制备方法技术

本发明专利技术涉及医疗制备技术领域，且公开了共包封苦参碱衍生物A6和DOX长循环脂质体的制备方法，包括以下操作步骤：S1、精密称取大豆卵磷脂、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺

【技术实现步骤摘要】
共包封苦参碱衍生物A6和DOX长循环脂质体的制备方法


[0001]本专利技术涉及医疗制备
，具体为共包封苦参碱衍生物A6和DOX长循环脂质体的制备方法。

技术介绍

[0002]肝癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一，具有较高的复发率，复发后的转移及对放化疗的耐药性，肝癌是我国第5位常见恶性肿瘤，在我国，由于肝癌而导致死亡的人数位列于恶性肿瘤致死人数的第二位。虽然现今对于肿瘤的相关治疗已经有了极大进步，但仍然存在着肿瘤的复发、转移和放化疗抵抗等现象。脂质体作为一种可以同时运载亲水性物质和亲脂性物质的药物载体，具有良好的生物相容性，提高药物的水溶性与稳定性，且对肿瘤部位具有良好的增强渗透滞留效应(EPR)，共包封苦参碱衍生物A6和DOX脂质体(PEG
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A6/DOX
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LP)可以更好地发挥抗肿瘤作用。
[0003]阿霉素(DOX)是临床广泛使用的一线抗癌药物，通过作用于细胞的DNA化学结构，以达到对生理活性的影响，在多种肿瘤的治疗中具有关键作用，但其具有的心脏毒性往往限制了剂量的使用以及临床应用。而脂质体良好的生物相容性和低毒副作用等正是阿霉素的良好解决方案。
[0004]苦参碱是从中药苦参中提取的有效生物活性成分，具有广泛的生物学活性，如抗炎、抗病毒、抗癌、镇痛、抗菌等多种药理作用，苦参碱作为一类广谱抗肿瘤药物而被广泛研究，对多种癌症方向均具有作用。苦参碱衍生物以苦参碱为起始原料,通过一系列多种不同反应通过拼接的想法合成了改善其的药理活性，完成了结构修饰的新型苦参碱类衍生物，从而达到增强其药用疗效的目的。本设计中使用的苦参碱衍生物A6具有良好的抗肝癌细胞增殖作用，其结构如图1所示。

技术实现思路

[0005](一)解决的技术问题
[0006]针对现有技术的不足，创造性提供了共包封苦参碱衍生物A6和DOX的长循环脂质体的制备方法，且其可对肝癌细胞HepG2发挥作用，具有良好的抑制肿瘤细胞的作用，且可降低毒副作用，提高药物的水溶性与稳定性以达到治疗的目的。
[0007](二)技术方案
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：共包封苦参碱衍生物A6和DOX长循环脂质体的制备方法，包括以下操作步骤：
[0009]S1、精密称取大豆卵磷脂、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000、A6于茄形瓶中，加入氯仿溶解，溶解完全，减压旋蒸形成均匀的透明质膜；
[0010]S2、将其置于真空干燥箱中烘干8h，烘干完成后，加入100mm硫酸铵溶液使均匀透明质膜溶解完全，在水浴摇床中孵育一段时间，孵育结束后，得到苦参碱衍生物A6脂质体混悬液；
[0011]S3、将脂质体混悬液移入玻璃瓶中，在冰浴条件下，用细胞超声破碎仪对水化液进行超声2min20s，超声120W，5s
×
5s；
[0012]S4、将超声后的脂质体混悬液移入截留分子量均为8000
‑
14000的透析袋中，在0.9％氯化钠溶液中进行透析10h，每2h换液一次，以达到替换外水相的目的，洗去硫酸铵，使其形成内外PH梯度差；
[0013]S5、替换外水相后，将透析液移至5ml容量瓶，加水定容至5ml，在透析定容后的脂质体中加入一定量的盐酸阿霉素水溶液，于55℃水浴摇床中进行孵育，即可得到苦参碱衍生物A6与阿霉素长循环脂质体混悬液；
[0014]S6、将孵育后的脂质体混悬液移入截留分子量均为8000
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14000的透析袋中，在质量浓度为1％的吐温80溶液及0.9％氯化钠溶液的混合溶液中进行透析10h，每2h换液一次，以达到除去脂质体中游离的苦参碱衍生物与阿霉素的目的，透析后即得到共包封苦参碱衍生物A6和DOX脂质体。
[0015](三)有益效果
[0016]本专利技术提供了共包封苦参碱衍生物A6和DOX长循环脂质体的制备方法，具备以下有益效果：
[0017](1)、本专利技术成功制备了一种共包封苦参碱衍生物A6和DOX长循环脂质体，并确定了其配方条件。通过细胞毒性实验证明了A6与DOX通过脂质体为载药方式，明显提高了其对肿瘤细胞的抑制能力，且双药效果明显优于单药，通过协同作用更好的发挥其抗肝癌细胞增殖作用，并且降低了其毒副作用，提高了原料药的水溶性。
附图说明
[0018]图1为分子结构式；
[0019]图2为正交实验影响因素表；
[0020]图3为正交实验表；
[0021]图4为正交实验结果分析表；
[0022]图5为脂质体包封率变化趋势表；
[0023]图6为脂质体包封率变化趋势表
[0024]图7为不同的苦参碱衍生物A6与大豆卵磷脂的比例对包封率的影响结果图；
[0025]图8为不同的阿霉素与大豆卵磷脂的比例对包封率的影响结果图；
[0026]图9为不同的DSPE
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PEG2000含量对包封率的影响结果图；
[0027]图10为A6与阿霉素协同数据表。
具体实施方式
[0028]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]如图1
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10所示，本专利技术提供一种技术方案：共包封苦参碱衍生物A6和DOX长循环脂质体的制备方法，包括以下操作步骤：
[0030]S1、精密称取大豆卵磷脂、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000、A6于茄形瓶中，加入氯仿溶解，溶解完全，减压旋蒸形成均匀的透明质膜；
[0031]S2、将其置于真空干燥箱中烘干8h，烘干完成后，加入100mm硫酸铵溶液使均匀透明质膜溶解完全，在水浴摇床中孵育一段时间，孵育结束后，得到苦参碱衍生物A6脂质体混悬液；
[0032]S3、将脂质体混悬液移入玻璃瓶中，在冰浴条件下，用细胞超声破碎仪对水化液进行超声2min20s，超声120W，5s
×
5s；
[0033]S4、将超声后的脂质体混悬液移入截留分子量均为8000
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14000的透析袋中，在0.9％氯化钠溶液中进行透析10h，每2h换液一次，以达到替换外水相的目的，洗去硫酸铵，使其形成内外PH梯度差；
[0034]S5、替换外水相后，将透析液移至5ml容量瓶，加水定容至5ml，在透析定容后的脂质体中加入一定量的盐酸阿霉素水溶液，于55℃水浴摇床中进行孵育，即可得到苦参碱衍生物A6与阿霉素长循环脂质体混悬液；
[0035]S6、将孵育后的脂质体混悬液移入截留分子量均为8000
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14000的透析袋中，在质量浓度为1％的吐温80溶液及0.9％氯化钠溶液的混合溶液中进行透析10本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.共包封苦参碱衍生物A6和DOX长循环脂质体的制备方法，其特征在于：包括以下操作步骤：S1、精密称取大豆卵磷脂、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000、A6于茄形瓶中，加入氯仿溶解，溶解完全，减压旋蒸形成均匀的透明质膜；S2、将其置于真空干燥箱中烘干8h，烘干完成后，加入100mm硫酸铵溶液使均匀透明质膜溶解完全，在水浴摇床中孵育一段时间，孵育结束后，得到苦参碱衍生物A6脂质体混悬液；S3、将脂质体混悬液移入玻璃瓶中，在冰浴条件下，用仪器对水化液进行超声2min20s，超声120W，5s
×
5s；S4、将超声后的脂质体混悬液移入截留分子量均为8000
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14000的透析袋中，在0.9％氯化钠溶液中进行透析10h，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵欣婷，王立升，江俊，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：