Cas酶和系统以及应用技术方案

本发明专利技术属于核酸编辑领域，特别是规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)技术领域。具体而言，本发明专利技术提供了一种新型的Cas酶，所述Cas酶与已报道的Cas酶的同源性较低，可以在细胞内和细胞外表现出核酸酶的活性，具有广泛的应用前景。前景。前景。

【技术实现步骤摘要】
Cas酶和系统以及应用


[0001]本专利技术涉及基因编辑领域，特别是规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)
具体而言，本专利技术涉及一种新型的CRISPR酶(或者，称之为CRISPR蛋白、Cas效应蛋白、Cas酶或Cas蛋白)，包含此类蛋白的融合蛋白，以及编码它们的核酸分子。本专利技术还涉及用于核酸编辑(例如，基因或基因组编辑)的复合物和组合物，其包含本专利技术的Cas蛋白或融合蛋白，或编码它们的核酸分子。

技术介绍

[0002]CRISPR/Cas技术是一种被广泛使用的基因编辑技术，它通过RNA引导对基因组上的靶序列进行特异性结合并切割DNA产生双链断裂，利用生物非同源末端连接或同源重组进行定点基因编辑。
[0003]CRISPR/Cas9系统是最常用的II型CRISPR系统，它识别3
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NGG的PAM基序，对靶标序列进行平末端切割。CRISPR/Cas Type V系统是一类新发现的CRISPR系统，它具有5
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TTN的基序，对靶标序列进行粘性末端切割，例如Cpf1,C2c1,Ca本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Cas蛋白，其特征在于，所述Cas蛋白为以下I
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III任一所述的Cas蛋白：I、Cas蛋白的氨基酸序列与SEQ ID No.11、SEQ ID No.2、SEQ ID No.1、SEQ ID No.9、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8、SEQ ID No.10或SEQ ID No.7序列相比，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、或至少99.9％的序列同一性，并且基本保留了其源自的序列的生物学功能；II、所述Cas蛋白的氨基酸序列与SEQ ID No.11、SEQ ID No.2、SEQ ID No.1、SEQ ID No.9、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8、SEQ ID No.10或SEQ ID No.7序列相比，具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加的序列，并且基本保留了其源自的序列的生物学功能；III、所述Cas蛋白包含SEQ ID No.11、SEQ ID No.2、SEQ ID No.1、SEQ ID No.9、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8、SEQ ID No.10或SEQ ID No.7所示的氨基酸序列。2.一种融合蛋白，所述融合蛋白包括权利要求1所述的Cas蛋白和其他的修饰部分。3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为编码权利要求1所述Cas蛋白的多核苷酸序列，或编码权利要求2所述融合蛋白的多核苷酸序列。4.一种gRNA，其特征在于，所述gRNA包括能够结合权利要求1所述的Cas蛋白的同向重复序列和能够靶向靶序列的引导序列。5.一种同向重复序列，其特征在于，所述同向重复序列包含SEQ ID No.34
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45任一所示的序列。6.一种载体，其特征在于，所述载体包含权利要求3所述的多核苷酸以及与之可操作连接的调控元件。7.一种CRISPR
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Cas系统，其特征在于，所述系统包括权利要求1所述的Cas蛋白以及至少一种权利要求4所述的gRNA。8.一种载体系统，其特征在于，所述载体系统包括一种或多种载体，该一种或多种载体包括：a)第一调控元件，该第一调控元件可操作地与权利要求4所述的gRNA连接，b)第二调控元件，该第二调控元件可操作地与权利要求1所述的Cas蛋白连接；其中组分(a)和(b)位于该系统的相同或不同载体上。9.一种组合物，其特征在于，所述组合物包含：(i)蛋白组分，其选自：权利要求1所述的Cas蛋白或权利要求2所述的融合蛋白；(ii)核酸组分，其选自：权利要求4所述的gRNA，或编码权利要求4所述的gRNA的核酸，或权利要求4所述的gRNA的前体RNA，或编码权利要求4所述的gRNA的前体RNA核酸；所述蛋白组分与核酸组分相互结合形成复合物。10.一种活化的CRISPR复合物，所述活化的CRISPR复合物包含：(i)蛋白组分，其选自：权利要求1所述的Cas蛋白或权利要求2所述的融合蛋白；(ii)核酸组分，其选自：权利要求4所述的gRNA，或编码权利要求4所述的gRNA的核酸，或权利要求4所述的gRNA的前体RNA，或编码权利要求4所述的gRNA的前体RNA核酸；
(iii)结合在权利要求4所述的gRNA上的靶序列。11.一种工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求1所述的Cas蛋白，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：李珊珊，孙洁，赵庆芝，刘锐恒，
申请(专利权)人：山东舜丰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：