一种Kdf1基因条件性敲除小鼠模型及其构建方法技术

本发明专利技术涉及基因工程小鼠模型技术领域，具体涉及一种Kdf1基因条件性敲除小鼠模型及其构建方法。构建方法包括以下依次进行的步骤：donor载体获取；gRNA的获取；获得可精准敲除Kdf1基因的条件性敲除小鼠模型。本技术方案解决利用现有技术的Kdf1基因功能缺陷小鼠模型难以实现Kdf1调控器官发育作用机制的精准研究的技术问题。本方案的小鼠模型，可以通过与多种组织来源的Cre小鼠交配传代，从而构建出可稳定传代的多种组织特异性敲除Kdf1基因的小鼠模型，避免因小鼠全身器官功能障碍所导致的胚胎致死，同时可以将牙胚上皮组织的Kdf1基因进行特异性敲除，为研究Kdf1基因的功能创造了条件。了条件。了条件。

【技术实现步骤摘要】
一种Kdf1基因条件性敲除小鼠模型及其构建方法


[0001]本专利技术涉及基因工程小鼠模型
，具体涉及一种Kdf1基因条件性敲除小鼠模型及其构建方法。

技术介绍

[0002]人类Kdf1基因(角质形成细胞分化因子1)于2013年发现，定位于人类染色体1p36.11，可编码有398个氨基酸的蛋白。小鼠Kdf1蛋白与人类Kdf1(C1orf172)蛋白具有90％的同源性，这为利用小鼠模型研究人类KDF1基因的功能奠定了极为有利的条件。尽管Kdf1基因在小鼠皮肤发育中的作用已初步确定，并已发现Kdf1蛋白特异性地表达在牙胚上皮中，几乎不表达在间充质，但关于Kdf1基因在与皮肤发育同源的牙齿及口腔粘膜上皮等部位中的发育作用尚不明确。迄今仅有3篇Kdf1基因突变与人类先天性缺牙的报道，Kdf1基因的功能及其致病性亟需进一步研究。
[0003]构建Kdf1基因缺陷小鼠模型是研究Kdf1基因的功能及其致病性的重要手段。2013年，Lee等人首次报道了Kdf1全身性功能缺陷的小鼠模型—shd小鼠，其技术手段为：利用N
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乙基...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Kdf1基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下依次进行的步骤：S1：donor载体获取：所述donor载体包括上游loxP位点和下游loxP位点；位于Kdf1基因的外显子2和外显子4位于上游loxP位点和下游loxP位点之间；S2：gRNA的获取；S3：获得Kdf1基因条件性敲除小鼠模型。2.根据权利要求1所述的一种Kdf1基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，在S1中，所述donor载体包括位于Kdf1基因的外显子2的上游839
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873bp的上游loxP位点和位于Kdf1基因的外显子4的下游560
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594bp的下游loxP位点。3.根据权利要求2所述的一种Kdf1基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，在S1中，所述donor载体包括从5
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端到3
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端依次设置的序列如SEQ ID NO.2所示的5
’
同源臂区、序列如SEQ ID NO.4所示的上游loxP位点、序列如SEQ ID NO.1所示的选择性敲除去、序列如SEQ ID NO.4所示的下游loxP位点以及序列如SEQ ID NO.3所示的3
’
同源臂区。4.根据权利要求3所述的一种Kdf1基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，在S2中，所述gRNA包括基因序列如SEQ ID NO.5所示的gRNA1、基因序列如SEQ ID NO.6所示的gRNA2、基因序列如SEQ ID NO.7所示的gRNA3以及基因序列如SEQ ID NO.8所示的...

【专利技术属性】
技术研发人员：余淼，韩冬，刘洋，刘浩辰，刘航伯，王佳羽，冯海兰，
申请(专利权)人：北京大学口腔医学院，
类型：发明
国别省市：