一种乌鳢显微注射的方法及应用技术

本发明专利技术适用于水产动物遗传育种和功能基因验证研究领域，提供了一种乌鳢显微注射的方法及应用，其中，乌鳢显微注射的方法包括以下步骤：以靶基因的反义吗啉环寡核苷酸或外源mRNA作为注射试剂；将注射试剂与注射指示剂进行混合，得到混合物；在乌鳢卵子受精后的30分钟内向单细胞期的乌鳢受精卵进行显微注射，将混合物导入乌鳢受精卵中。该方法是第一次建立乌鳢胚胎的显微注射方法，并首次应用于反义吗啉环寡核苷酸基因敲降和构建外源mRNA表达模型，该技术既可用于研究乌鳢基因功能，又能用于精准修饰乌鳢内源基因，为乌鳢的基因改良遗传育种提供强有力的技术支持。传育种提供强有力的技术支持。传育种提供强有力的技术支持。

【技术实现步骤摘要】
一种乌鳢显微注射的方法及应用


[0001]本专利技术属于水产动物遗传育种和功能基因验证研究领域，尤其涉及一种乌鳢显微注射的方法及应用。

技术介绍

[0002]乌鳢(Channa argus)隶属鲈形目(Perciformes)、鳢科(Channidae)、鳢属(Channa)，俗称黑鱼、生鱼、乌鱼、财鱼等，是我国重要的淡水经济鱼类，分布范围较广，北至黑龙江流域南至四川、云南、广东。乌鳢体色较深呈灰黑色，头部和体背侧对称排列的不规则斑块。金乌鳢(Albino Channa argus)是野生乌鳢体色相关基因突变产生的一种白化品系，与之前报道四川省嘉陵江中下游流域出现的白甲乌鳢不同的是金乌鳢体表呈金黄色，眼球为深红色，金乌鳢与野生乌鳢两者除体色以及眼球颜色差异外极其相似，金乌鳢因其通体金黄色具有较高的市场价值。
[0003]近年来，我国多种经济鱼类遗传育种工作相继开展，而乌鳢也培育出了多个新品种，如“玉龙1号”、“雄鳢1号”等。然而目前乌鳢的遗传育种工作还主要基于传统的人工选育方法，全基因组选择育种及分子辅助选择育种等技术在乌鳢遗传育种中还本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乌鳢显微注射的方法，其特征在于，包括以下步骤：以靶基因的反义吗啉环寡核苷酸或外源mRNA作为注射试剂；将注射试剂与注射指示剂进行混合，得到混合物；在乌鳢卵子受精后的30分钟内向单细胞期的乌鳢受精卵进行显微注射，将混合物导入乌鳢受精卵中。2.根据权利要求1所述的一种乌鳢显微注射的方法，其特征在于，外源mR NA为体外转录乌鳢slc45a2 mRNA；乌鳢slc45a2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的一种乌鳢显微注射的方法，其特征在于，靶基因的反义吗啉环寡核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.根据权利要求1所述的一种乌鳢显微注射的方法，其特征在于，所述注射指示剂为酚红溶液。5.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的一种乌鳢显微注射的方法，其特征在于，所述混合物中，反义吗啉环寡核苷酸的终浓度为0.5
‑
1.5mM，或外源mRN A的终浓度为150
‑
250ng/μL。6.根据权利要求1所述的一种乌鳢显微注射的方法，其特征在于，乌鳢受精卵的制备方法包括以下步骤：挑选性成熟的雌雄乌鳢亲鱼分别暂养在养殖系统中，注射绒毛膜促性腺激素和促黄体素释放激素类似物混合物进...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙冬磊，李昀，齐鑫，温海深，李建龙，朱明鑫，陶泽鑫，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：