一种杂食性家蚕的分子育种方法及应用方法技术

本发明专利技术属于农业生物技术领域，涉及家蚕育种技术领域，具体涉及一种杂食性家蚕的分子育种方法及应用。本发明专利技术以家蚕味觉受体GR43为靶基因，设计靶向其第一个外显子的sgRNA，通过基因编辑技术敲除该基因，证明了缺失GR43的家蚕突变体可以取食多种非寄主植物，食谱范围大大拓宽，成为了一种杂食性家蚕，并且该突变体家蚕在人工饲料上的存活率也显著高于野生型家蚕，有利于家蚕的大规模饲养。可见，本发明专利技术获得了一种杂食性家蚕，大大拓宽了家蚕的食谱，十分有利于寻找可替代桑叶的非寄主植物来饲养家蚕。此外，该杂食性家蚕在人工饲料上的存活率也显著高于野生型家蚕，有利于家蚕的大规模人工饲养。人工饲养。人工饲养。

【技术实现步骤摘要】
一种杂食性家蚕的分子育种方法及应用方法


[0001]本专利技术属于农业生物
，涉及家蚕育种
，具体涉及一种杂食性家蚕的分子育种方法及应用。

技术介绍

[0002]家蚕(Bombyxmori L.)是我国重要的经济昆虫，在中国古代的丝绸之路中起着十分重要的作用。经过几千年的人工选育，家蚕几乎只能以桑叶为食，成为了典型的单食性昆虫。家蚕的饲养严重依赖于新鲜的桑叶，因此家蚕的养殖区域受到了严格的地理和气候条件的限制。并且，家蚕饲养通常以农户散养为主，很难进行大规模工厂化生产，从而严重制约了整个蚕桑业的发展。因此，如何进行家蚕的大规模饲养，是整个蚕桑业面临的瓶颈之一。解决这个问题的关键，是培育杂食性的家蚕新品种。
[0003]家蚕幼虫的食性主要决定于位于头部口器上的下颚组织，该组织上分布有大量的味觉感受受体，可以鉴别桑叶中特有的次生代谢产物。如果鉴定出了特定的次生代谢产物，即可以产生取食行为，否则就可能导致拒食。有研究表明，通过显微手术去除家蚕的下颚，家蚕的食性会大大地拓宽，从而能够取食平时根本不吃的非寄主植物。
[0004本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂食性家蚕的分子育种方法，其特征在于，通过基因编辑技术使家蚕缺失GR43基因或使家蚕的GR43基因表达量降低，从而培育出杂食性家蚕。2.根据权利要求1所述的一种杂食性家蚕的分子育种方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、针对家蚕GR43基因设置引物，对家蚕基因组cDNA进行PCR扩增；S2、以家蚕GR43基因的外显区域作为靶位点合成sgRNA引物，然后通过PCR法从家蚕cDNA扩增产物中获得sgRNA的双链DNA，再体外转录合成sgRNA；S3、用步骤S2的sgRNA与cas9蛋白对家蚕基因组DNA进行切割，获取具有体外切割活性的sgRNA；S4、将步骤S3的sgRNA与cas9蛋白一起注入发育早期的家蚕卵内，然后将鉴定出GR43基因发生了移码突变的阳性个体与野生型个体交配，再从下代挑选发生了移码突变的阳性个体进行自交，最后从自交后代中鉴定出纯合的缺失突变体，即为杂食性家蚕。3.根据权利要求2所述的一种杂食性家蚕的分子育种方法，其特征在于，步骤S1所述引物包括上游引物和下游引物，其中上游引物和下游引物分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。4.根据权利要求2所述的一种杂食性家蚕的分子育种方法，其特征在于，步骤S1所述PCR扩增的体系为：rTaq酶0.3μL、10
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PCR Buffer 2μL、家蚕cDNA 1μL、上游引物1μL、下游引物1μL、dNTP ...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄立华，江健钊，李时宇，冯兴暴，袁雅菲，杨振文，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：