一种基于CRISPR/Cas9获得MTHFR基因定点突变动物模型构建方法及其用途技术

本发明专利技术提供的一种基于CRISPR/Cas9获得MTHFR基因定点突变动物模型的构建方法，包括如下步骤：(1)基于目标基因MTHFR设计sgRNA；(2)根据sgRNA序列设计供体寡核苷酸供体DNA；(3)将sgRNA、Cas9mRNA和供体DNA混合物注射入鼠受精卵中，将注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠子宫中，将得到的F0代小鼠划分为野生型小鼠或阳性杂合子小鼠，将阳性杂合子小鼠与野生型小鼠进行交配，获得F1代小鼠，得到阳性子代小鼠为F1代杂合子进行杂交繁育，最后基因鉴定获得；所得动物模型为研究MTHFR

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR/Cas9获得MTHFR基因定点突变动物模型构建方法及其用途


[0001]本专利技术涉及基因编辑领域，具体涉及一种基于CRISPR/Cas9获得MTHFR基因定点突变动物模型构建方法及其用途。

技术介绍

[0002]自1990年到2019年，全球卒中及中风死亡人数呈逐年上涨趋势。高血压、糖尿病、高血脂、肥胖、吸烟等为脑卒中的主要危险因素。但研究显示在同等程度血压升高状态下，中国人更容易发生脑卒中，研究发现，该现象与高血压人群普遍存在高同型半胱氨酸(Hcy)及低叶酸的水平有关，血压与Hcy同时升高的患者发生脑卒中的风险增至12.7倍。此外研究发现，高Hcy水平与缺血性心脏病、深静脉血栓形成等心血管疾病风险增加相关。其可能的机制为Hcy可通过促进氧化应激反应及血管内皮损伤、促进血栓形成、导致糖脂代谢紊乱等机制促进动脉粥样硬化的发生发展，最终显著增加心脑血管疾病风险。
[0003]环境因素和遗传因素共同影响Hcy水平。既往研究提示性别、肾功能、B族维生素摄入量等环境因素，MTHFR、MTRR、DEPT1、CBS基因多态性等本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR/Cas9获得MTHFR基因定点突变动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)基于目标基因MTHFR设计sgRNA；(2)根据所述的sgRNA序列设计供体寡核苷酸供体DNA；(3)将sgRNA、Cas9 mRNA和供体DNA的混合物注射入鼠受精卵中，将注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠子宫中，出生的小鼠为被编辑的F0代小鼠，通过基因型筛选将所述F0代小鼠划分为野生型小鼠或阳性杂合子小鼠，然后将所述阳性杂合子小鼠与野生型小鼠进行交配，获得F1代小鼠，再次通过基因型筛选后得到的阳性子代小鼠为F1代杂合子，然后将F1代杂合子进行杂交繁育，最后将繁育所得的后代进行基因型鉴定获得杂合型突变小鼠、纯合型突变小鼠和野生型小鼠。2.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas9获得MTHFR基因定点突变动物模型的构建方法，其特征在于，所述sgRNA的序列如SEQ ID NO.1所示；和/或所述供体DNA的序列如SEQ ID NO.2所示。3.根据权利要求1或2所述的基于CRISPR/Cas9获得MTHFR基因定点突变动物模型的构建方法，其特征在于，所述sgRNA、Cas9 mRNA和供体DNA的混合物中，sgRNA的浓度为12.5ng/μL，Cas9 mRNA的浓度为25ng/μL，供体DNA的浓度为12.5ng/μL。4.根据权利要求1
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3任一项所述的基于CRISPR/Cas9获得MTHFR基因定点突变动物模型的构建方法，其特征在于，所述基因型鉴定或筛选步骤中，繁育的小鼠出生后1
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【专利技术属性】
技术研发人员：李建平，霍勇，张岩，鲍明慧，赵静，范芳芳，刘博，贾佳，
申请(专利权)人：北京大学第一医院，
类型：发明
国别省市：