一种同时提取并测定血清中PCOS相关十二种类固醇激素的LC-MS/MS试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种同时提取并测定血清中PCOS相关十二种类固醇激素的LC

【技术实现步骤摘要】
一种同时提取并测定血清中PCOS相关十二种类固醇激素的LC
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MS/MS试剂盒


[0001]本专利技术属于医学检测
，具体涉及一种同时提取并测定血清中PCOS相关十二种类固醇激素的LC
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MS/MS试剂盒。

技术介绍

[0002]类固醇激素，又称甾体激素，是一类四环脂肪烃化合物，属于脂溶性激素。脊椎动物的肾上腺激素属于类固醇激素，具体可分为肾上腺皮质激素和性激素两类。肾上腺皮质激素由肾上腺皮质分泌产生，目前从肾上腺皮质提取液中分离的类固醇化合物有30余种，已知生理作用的主要有调节糖代谢、调节水盐代谢；性激素可分为雄性激素和雌性激素，它们与动物的性别及第二性征的发育有关。雄性激素和雌性激素的功能虽然很不相同，但它们在结构上却很相似。两类性激素都可以从胆固醇衍生而来，而且二者在体内可以相互转变，并以不同比例同时存在于动物个体。
[0003]类固醇激素在维持生命、调节性功能方面具有极重要的医药价值，同时对机体发展、免疫调节、皮肤疾病治疗方面有明确的作用。类固醇激素的同分异构体非常多，导致生物样本中类固醇浓度精确测定异常困难，高选择性且高灵敏度地测定生物样本中某一种特定的类固醇激素是目前尚难以达到。目前临床上对类固醇激素的检测多集中于化学发光领域，成本较高且操作复杂，所以迫切需要简单易行、经济适用、高通量并精确定量的检测方法。
[0004]武汉迈特维尔生物科技有限公司于2022年3月30日申请的中国专利CN202210321735.9，专利技术名称“一种同时检测5种类固醇激素的方法、试剂盒及其应用”，提供了一种同时检测5种类固醇激素的方法、试剂盒及其应用，属于类固醇激素检测
所述方法包括：基于LC
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MS/MS对经过前处理后的待测样品进行检测，通过优化前处理方法，从而实现对睾酮、雄烯二酮、17α
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羟孕酮、双氢睾酮、硫酸脱氢表雄酮5种类固醇激素的准确检测，该方法可以应用于临床雄激素血症中重要类固醇激素的检测项目，有助于给出受试者体内上述5种类固醇激素的真实浓度的真实水平，非常有助于临床或实验室使用，对于高雄激素血症、多囊卵巢综合征的辅助诊断具有重要指导意义，具有较高的实际应用价值。不过，该方法只能一次性检测5种类固醇激素，无法涵盖临床病理所需要检测的项目指标。
[0005]天津国科医工科技发展有限公司于2022年03月11日申请的中国专利CN202210241244.3，专利技术名称“基于磁性固相萃取的类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法”，公开了一种基于磁性固相萃取的类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法，包括以下步骤：S1、磁性固相萃取方法进行样本中类固醇激素的前处理，制备测试样：S2、构建标准曲线；S3、采用液相色谱串联质谱法对测试样进行检测，结合构建的标准曲线得到测试样中的类固醇激素的含量。不过，该方法采用的磁性固相萃取技术尚未在临床检测上普遍应用，且洗脱过程中高浓度的表面活性剂可能会影响检测，磁性分子材料制备繁琐，将会导致单
个检测的费用高昂，不适用临床检测。
[0006]广西壮族自治区妇幼保健院于2017年07月03日申请的中国专利CN201710534316，专利技术名称“干血斑中7种类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法”，公开了一种干血斑中7种类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法，所述的7种类固醇激素分别为：17
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羟基孕酮、雄烯二酮、双氢睾酮、孕酮、皮质醇、11
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脱氧可的松和醛固酮。该方法检测经过预处理的干血斑中上述7种类固醇激素，样品经甲醇沉淀蛋白，并超声提取，提取后过滤净化，以甲醇和水作为流动相，经C18色谱柱进行梯度分离，目标化合物在电喷雾正、负离子模式下电离，采用多反应监测扫描模式，内标定量法分析。虽然其用甲醇萃取干血片后即可进行分析，但指标的离子化效率不高，检测下限无法满足临床需求。

技术实现思路

[0007]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种从血清样本中提取12项PCOS相关类固醇激素的前处理及检测试剂盒。试剂盒配合使用液相色谱串联质谱（LC
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MS/MS）法测定血清样本中类固醇激素。血清样本使用前处理试剂盒处理后取上清进样。在电喷雾电离模式下，采用多反应监测模式（MRM）检测，最后使用内标法进行准确定量分析。
[0008]采用固相萃取的前处理方法，处理过程简单、高效；制备7个标准工作溶液浓度点，采用LC
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MS/MS的检测方法，建立标准工作曲线，检测灵敏度高、特异性强；可同时提取并检测12种PCOS相关类固醇激素，涵盖PCOS全部检测指标，可适用于临床检测。
[0009]本专利技术涉及的缩写词定义如下：17
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OH
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P：17α
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Hydroxyprogesterone，17α
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羟基孕酮；DHT：Dihydrotestosterone，双氢睾酮；P：Progesterone，孕酮；T：Testosterone，睾酮；E1：Estrone，雌酮；E2：Estradiol，雌二醇；E3：Estriol，雌三醇；E：Cortisone，可的松；DHEA
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S：Dehydroepiandrosterone sulfate，硫酸脱氢表雄酮；DHEA：Dehydroepiandrosterone，脱氢表雄酮；A4：Androstenedione，雄烯二酮；F：Hydrocortisone，皮质醇；MRM：Multiple reaction monitoring，多反应监测；PCOS：Polycystic ovarian syndrome，多囊卵巢综合征；PP：Polypropylene，聚丙烯；LOD：Limit of detection，检测限；CV：Variable coefficient，变异系数；SD：Standard deviation，标准偏差；CE：Collision Energy，碰撞能量；CCL2：Collision Cell Lens 2，碰撞室入口电压；EV：Entrance Voltage，入口电压。
[0010]一方面，本专利技术提供了一种血液样本的前处理方法。
[0011]所述的前处理方法为固相萃取，包括使用缓冲液冲洗已上样收集板。
[0012]所述的缓冲液的成分为：30%
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35%甲醇、18%
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22%乙腈，所述的缓冲液中的成分单独依次使用；优选地，所述的缓冲液的成分为：33%
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35%甲醇、19%
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21%乙腈；进一步优选地，所述的缓冲液的成分为：33%甲醇、20%乙腈；所述的前处理方法中还包括洗脱步骤，所述的洗脱步骤中的洗脱液为乙腈和甲醇的混合液。优选地，所述的乙腈和甲醇的体积比为3：1。
[0013]所述的前处理方法中还包括洗脱后吹干再进行复溶的步骤；所述的复溶所用的复溶液为甲醇。优选地，所述的复溶液为体积本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血液样本的前处理方法，其特征在于，为固相萃取，包括使用缓冲液冲洗已上样收集板，所述的缓冲液的成分为：30%
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35%甲醇、18%
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22%乙腈；所述的缓冲液中的成分单独依次使用。2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述的缓冲液的成分为：33%
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35%甲醇、19%
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22%乙腈。3.根据权利要求2所述的前处理方法，其特征在于，还包括洗脱步骤，所述的洗脱步骤中的洗脱液为乙腈和甲醇的混合液。4.根据权利要求3所述的前处理方法，其特征在于，所述的乙腈和甲醇的体积比为3：1。5.根据权利要求4所述的前处理方法，其特征在于，还包括洗脱后吹干再进行复溶的步骤；所述的复溶所用的复溶液为甲醇。6.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）血清中加入混合内标工作液，混匀静置；（2）加入甲醇混匀离心取上清液得样品A；（3）样品A加超纯水混匀得样品B；（4）收集板用甲醇和水进行预处理；（5）样品B加入收集板加压上样；（6）依次使用30%
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35%甲醇、18%
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22%乙腈冲洗收集板；（7）体积比为3：1的乙腈和甲醇的混合液洗脱；（8）洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨宏，乌碧莎乔希，陈怡昭，冯涛，邹浩，
申请(专利权)人：苏州颐坤生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：