一种液质联用检测牧草中氟喹诺酮类药物残留的方法技术

本发明专利技术公开了一种液质联用检测牧草中氟喹诺酮类药物残留的方法，本发明专利技术以牧草为检测对象，通过对牧草进行预处理，加入内标工作液和缓冲液，再经过提取剂提取、萃取盐萃取、分散剂分散净化、吹干、复溶、过滤多个步骤处理制备得到供试品溶液，最后将供试品溶液在一定的测定条件下进行超高效液相色谱与质谱联用的测定。本方法检测7种氟喹诺酮类药物在0.5

【技术实现步骤摘要】
一种液质联用检测牧草中氟喹诺酮类药物残留的方法


[0001]本专利技术涉及药物残留量检测
，具体涉及一种液质联用检测牧草中氟喹诺酮类药物残留的方法。

技术介绍

[0002]氟喹诺酮类药物属于第三代诺喹酮类抗菌药物，因其具有抗菌谱广、高效、低毒且无交叉耐药性等优点，在禽畜养殖业常被用于禽畜疾病的防治以及被用作饲料添加剂。动物肠胃对抗生素的生物利用率有限，约60％～90％的抗生素会以药物原形或代谢物的形态通过排泄物排入环境中(Bu等，2013；Christou等，2018)，造成环境风险。由于抗生素大多较为稳定，部分抗生素固定相稳定存在150天以上，部分抗生素随着畜禽粪便进入土壤，在土壤中可持续5～9个月(Kuppusamy等，2018；Song等，2017)。在农业生态系统的各种介质(包括土壤、水、作物等)中都已检测到高浓度的抗生素残留(Yang等，2017)。当畜禽粪便直接用于农业施肥时，抗生素有可能在土壤中积累，并被作物吸收。有研究表明，抗生素有可能在不同的植物中积累，并通过食物链转移给人类，对公共健康构成潜在风险(倪治华等，2020)。因此，牧草中药物的残留量也是评判牧草品质优劣和进出口贸易的一个关键指标。
[0003]目前，氟喹诺酮类药物的检测方法主要有微生物抑制法、电化学法、酶联免疫吸附测定法、电解分析法、高效液相色谱法、高效液相色谱
‑
质谱联用等(卢圣欣等，2007；刘畅等，2019)，检测基质主要是畜禽肌肉组织、鸡蛋、血浆、蔬菜等(Yu等，2018；穆小婷等，2021)。而针对牧草中氟喹诺酮药物残留的检测方法尚未见公开报道，因此，有必要对牧草中氟喹诺酮类药物残留的检测方法进行精准分析，研究牧草中氟喹诺酮类药物残留检测方法对于氟喹诺酮类药物残留风险评估、质量安全监管、牧草品质评价以及进出口检测等具有十分重要的意义。

技术实现思路

[0004]因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中没有适用于准确检测牧草中多种氟喹诺酮类药物残留的方法的缺陷，从而提供简便、快速、灵敏、准确且经济的一种液质联用检测牧草中氟喹诺酮类药物残留的方法。
[0005]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]一种牧草中氟喹诺酮类药物残留检测用供试品溶液的制备方法，包括：对牧草进行预处理，加入内标工作液和Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲液，再加入乙酸乙腈混合液超声提取，然后加入无水硫酸钠和氯化钠离心获取提取液，向提取液中加入乙二胺
‑
N
‑
丙基硅烷、十八烷基硅烷和无水硫酸钠分散净化、吹干，用甲酸水溶液
‑
乙腈混合液溶解，经滤膜过滤，获得供试品溶液。
[0007]优选的，所述内标工作液为恩诺沙星
‑
D5、环丙沙星
‑
D8、诺氟沙星
‑
D5的混合内标工作液；所述内标工作液的溶剂为甲醇；以所述牧草质量为基准，所述内标工作液中恩诺沙星
‑
D5、环丙沙星
‑
D8、诺氟沙星
‑
D5的用量均为40
‑
100μL/g，质量浓度均为0.4
‑
1.0mg/L。
[0008]优选的，所述Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲液的物质的量浓度为0.05
‑
0.1mol/L；以所述牧草质量为基准，所述Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲液用量为10
‑
20mL/g。
[0009]优选的，所述乙酸乙腈混合液中乙酸的体积分数为1
‑
4％；以所述牧草质量为基准，所述乙酸乙腈混合液的用量为10
‑
40mL/g。
[0010]优选的，以所述牧草质量为0.5g计，所述无水硫酸钠的用量为3
‑
5g；所述氯化钠的用量为1
‑
2g。
[0011]优选的，所述乙二胺
‑
N
‑
丙基硅烷的用量为20
‑
80mg/mL；所述十八烷基硅烷的用量为20
‑
80mg/mL；所述无水硫酸钠的用量为100
‑
300mg/mL；
[0012]和/或，所述甲酸水溶液
‑
乙腈混合液中，甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.05
‑
0.2％，甲酸水溶液与乙腈的体积比为9:1。
[0013]优选的，所述预处理为剪碎、冷冻干燥、研磨成粉；
[0014]和/或，所述超声的频率为50～100Hz，超声的时长为15
‑
30min；
[0015]和/或，所述离心的转速为5000
‑
10000r/min，离心的时长为1
‑
10min；
[0016]和/或，所述分散净化步骤中采用涡旋混匀；
[0017]和/或，所述吹干为在30
‑
40℃下氮气吹干；
[0018]和/或，所述配制内标工作液的同时，还需配制混合标准溶液，所述混合标准溶液的溶剂为甲醇，混合标准工作液中氟喹诺酮类药物的质量浓度均为0.5～1.5mg/L。
[0019]优选的，所述氟喹诺酮类药物为培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星中的至少一种。
[0020]本专利技术还提供一种液质联用检测牧草中氟喹诺酮类药物残留的方法，包括：获取上述的一种牧草中氟喹诺酮类药物残留检测用供试品溶液的制备方法获得的供试品溶液，采用超高效液相色谱
‑
质谱联用的方法对供试品溶液进行检测。
[0021]优选的，所述超高效液相色谱的检测条件为：色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18，2.1mm
×
100mm，1.8μm；流动相A为含有5mmol/L乙酸铵的甲酸水溶液；流动相B为甲醇；流速为0.3mL/min；进样量为5μL；柱温为35℃；梯度洗脱程序为：0
‑
3min，2％B线性变化至35％B；3
‑
5min，35％B线性变化至80％B；5
‑
5.1min，80％B线性变化至100％B；5.1
‑
6min，保持100％B；6
‑
7min，100％B降为2％B；
[0022]和/或，所述质谱的检测条件为：电喷雾离子源，正离子扫描模式；多反应检测：毛细管电压为3000V；离子源温度为150℃；干燥气温度为150℃；干燥气流量为15L/min；雾化气压力为35psi；鞘气温度为300℃；鞘气流量为11L/min。
[0023]本专利技术技术方案，具有如下优点：
[0024]1.本专利技术提供的一种牧草中氟喹诺酮类药物残留检测用供试品溶液的制备方法，包括：对牧草进行预处理，加入内标工作液和Na2EDTA...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种牧草中氟喹诺酮类药物残留检测用供试品溶液的制备方法，其特征在于，包括：对牧草进行预处理，加入内标工作液和Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲液，再加入乙酸乙腈混合液超声提取，然后加入无水硫酸钠和氯化钠离心获取提取液，向提取液中加入乙二胺
‑
N
‑
丙基硅烷、十八烷基硅烷和无水硫酸钠分散净化、吹干，用甲酸水溶液
‑
乙腈混合液溶解，经滤膜过滤，获得供试品溶液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述内标工作液为恩诺沙星
‑
D5、环丙沙星
‑
D8、诺氟沙星
‑
D5的混合内标工作液；所述内标工作液的溶剂为甲醇；以所述牧草质量为基准，所述内标工作液中恩诺沙星
‑
D5、环丙沙星
‑
D8、诺氟沙星
‑
D5的用量均为40
‑
100μL/g，质量浓度均为0.4
‑
1.0mg/L。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲液的物质的量浓度为0.05
‑
0.1mol/L；以所述牧草质量为基准，所述Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲液用量为10
‑
20mL/g。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述乙酸乙腈混合液中乙酸的体积分数为1
‑
4％；以所述牧草质量为基准，所述乙酸乙腈混合液的用量为10
‑
40mL/g。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的制备方法，其特征在于，以所述牧草质量为0.5g计，所述无水硫酸钠的用量为3
‑
5g；所述氯化钠的用量为1
‑
2g。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述乙二胺
‑
N
‑
丙基硅烷的用量为20
‑
80mg/mL；所述十八烷基硅烷的用量为20
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：费丹，徐俊，周瑶敏，王梦芝，侯玉洁，谢敏，广业兰，黄恒康，邬磊，
申请(专利权)人：江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所，
类型：发明
国别省市：