一种同时测定植物油中多种甾醇的方法技术

本发明专利技术涉及食用油成分测定技术领域，更具体而言，涉及一种同时测定植物油中多种甾醇的方法。具体步骤包括：将植物油进行前处理：取植物油放入反应釜中，加入无水乙醇，称重，充分混匀后加热，并保持微沸，停止加热后冷却，补足失重，充分混匀，离心，取上清液过滤，制得待测液；将制得的待测液用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定植物油中多种甾醇的方法


[0001]本专利技术涉及食用油成分测定
，更具体而言，涉及一种同时测定植物油中多种甾醇的方法。

技术介绍

[0002]植物固醇，是以游离状态或与脂肪酸和糖等结合的状态存在的一种功能性成分，广泛存在于蔬菜、水果等各种植物的细胞膜中。植物固醇，又称植物甾醇，属于植物性甾体化合物。植物固醇的主要成分包括谷固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇和相应的烷醇等，均以环戊烷全氢菲为主架结构，并含有醇基，它们与胆固醇结构上的区别是在C
24
上多了一些侧链，如谷固醇在C
24
上有一个乙基，菜油固醇在C
24
上有一个甲基，而豆固醇的结构与谷固醇一样，只是C
22
上是一个双键。植物固醇含量较高的植物食物包括植物油类、坚果种子类、豆类等。植物油中植物固醇含量以玉米胚芽油最高，其次为芝麻油；坚果种子类中开心果含量最高，其次为黑芝麻；豆类中以黄豆含量最高，其次为青豆；蔬菜水果及薯类中植物固醇含量较低。
[0003]植物固醇的相对密度略大于水，不溶于水、酸和碱，可溶于多种有机溶剂，如溶解于乙醚、苯氯仿、乙酸乙酯、二硫化碳和石油醚。植物固醇的物理化学性质主要表现为疏水性，但因其结构上带有羟基，故又具有亲水性，所以植物固醇具有乳化性。经溶剂结晶获得的植物固醇通常为针状白色结晶，其商品则多为粉末状或片状。植物固醇的相对分子质量约为386～456Da，熔点较高，都超过100℃，最高达215℃。
[0004]植物固醇是植物中的一种活性成分，对人体健康有很多益处，被科学家们誉为“生命的钥匙”。研究发现，植物固醇有降低血液胆固醇、防治前列腺肥大、抑制肿瘤、抑制乳腺增生和调节免疫等作用。国内外研究表明，植物固醇在肠道内可以与胆固醇竞争，减少胆固醇吸收，有效地降低高脂血症患者血液中的“坏胆固醇(包括总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇)含量，而不影响血液中的“好胆固醇(高密度脂蛋白胆固醇)，对高血脂患者有很好的降脂效果。据统计，膳食中植物固醇摄入量越高，人群罹患心脏病和其他慢性病的危险性越少。因此，它得到了世界心脏组织、美国心脏协会、英国心脏基金会、德国营养医学和食疗学会、澳大利亚心脏学会等世界权威机构的大力推荐。植物甾醇具有这一特殊的生理功效，它的奥秘是它能够在脂肪微团的运输和吸收时和胆固醇竞争，减少胆固醇的吸收，导致血液中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的降低，只有很少部分的植物甾醇被人体吸收，同时未被吸收的胆固醇将进入机体循环或者随粪便排出。
[0005]目前对植物甾醇的测定方法有分光光度计法、酶法、液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、气相色谱
‑
质谱法等。比色法样品前处理需要提取样品中的脂肪，且容易受到其他甾醇和甘油三酯的干扰，造成结果的显著偏大。操作繁杂、误差大、重复性差，仅适用于动物性食品。酶法技术含量较高，特异性强，仅适用于动物性食品。液相色谱法采用波长205nm～210nm检测，如此低的检测波长使得待测组分不能与实际样品中的基体完全分离，而干扰其准确定量。气相色谱法的选择性较高，分离效果好。气相色谱
‑
质谱法操作复杂，耗费更
大。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一，为此，本专利技术的一个方面的目的在于，提供一种同时测定植物油中多种甾醇的方法，包括以下具体步骤：
[0007]S1.将植物油进行前处理：取植物油放入反应釜中，加入无水乙醇，称重，充分混匀后加热，并保持微沸，停止加热后冷却，补足失重，充分混匀，离心，取上清液过滤，制得待测液；
[0008]S2.将S1中制得的待测液用液相色谱
‑
质谱联用仪进行测定，根据定量离子色谱峰的峰面积和外标法标准工作曲线定量，实现对植物油中多种甾醇的同时测定。
[0009]优选的，所述S1植物油为0.5g时加入无水乙醇70ml；待测液经无水乙醇回流提取。
[0010]优选的，所述S1中充分混匀后放入回流冷凝器中加热，并保持微沸30min，停止加热后冷却至室温。
[0011]优选的，所述S1中补足失重用无水乙醇。
[0012]优选的，所述S1中离心采用ThermoFisher公司Multifuge
×
1R高速冷冻离心机，转速为8000r/min，离心时间为5min。
[0013]优选的，所述S1中上清液过滤用0.22μm尼龙滤膜。
[0014]优选的，所述S2中液相色谱
‑
质谱联用仪流动相由流动相A和流动相B组成，采用梯度洗脱。
[0015]优选的，所述液相色谱
‑
质谱联用仪液相条件如下：SCIEX Exion LC系统；色谱柱：C
18
规格3mm
×
100mm，填料2.6μm；流动相A：0.1％甲酸水溶液，流动相B：甲醇；进样量：5μL；流速：0.6ml/min；柱温：40℃。
[0016]优选的，所述采用梯度洗脱，流动相的总体积为100％计，
[0017]在0分钟，流动相A的体积为30％，流动相B的体积为70％；
[0018]在1分钟，流动相A的体积为30％，流动相B的体积由70％；
[0019]在7分钟，流动相A的体积为2％，流动相B的体积为98％；
[0020]在14分钟，流动相A的体积为2％，流动相B的体积为98％；
[0021]在14.1分钟，流动相A的体积为30％，流动相B的体积为70％；
[0022]在20分钟，流动相A的体积为30％，流动相B的体积为70％。
[0023]优选的，所述液相色谱
‑
质谱联用仪质谱条件如下：SCIEX Triple Quad
TM
3500系统；离子源：APCI源；扫描方式：正离子模式；离子源参数：NC电压：3V；气帘气：20psi；雾化气GS1：40psi；源温度TEM：500℃；碰撞气CAD：8。
[0024]本专利技术所具有的有益效果如下：
[0025]本专利技术采用液相色谱串联质谱法检测，采用梯度洗脱色谱条件，外标法标准工作曲线定量，并满足多种植物油中甾醇的限度要求，测定低限达5ng/mL，线性关系良好分离效果好，准确度高，而且灵敏度高，检测成本和操作难度大大降低，能够快速、简便、准确地检测物油中甾醇含量，可作为植物油中甾醇类物质检测的主要方法。
[0026]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0027]本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
[0028]图1是本专利技术实施例植物油9种甾醇线性关系曲线图；
[0029]图2是本专利技术实施例植物油中β
‑
谷甾醇典型色谱图；
[0030]图3是本专利技术实施例植物油中菜油甾醇典型色谱图；
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时测定植物油中多种甾醇的方法，其特征在于：包括以下具体步骤：S1.将植物油进行前处理：取植物油放入反应釜中，加入无水乙醇，称重，充分混匀后加热，并保持微沸，停止加热后冷却，补足失重，充分混匀，离心，取上清液过滤，制得待测液；S2.将S1中制得的待测液用液相色谱
‑
质谱联用仪进行测定，根据定量离子色谱峰的峰面积和外标法标准工作曲线定量，实现对植物油中多种甾醇的同时测定。2.根据权利要求1所述的一种同时测定植物油中多种甾醇的方法，其特征在于：所述S1植物油为0.5g时加入无水乙醇70ml；待测液经无水乙醇回流提取。3.根据权利要求1所述的一种同时测定植物油中多种甾醇的方法，其特征在于：所述S1中充分混匀后放入回流冷凝器中加热，并保持微沸30min，停止加热后冷却至室温。4.根据权利要求1所述的一种同时测定植物油中多种甾醇的方法，其特征在于：所述S1中补足失重用无水乙醇。5.根据权利要求1所述的一种同时测定植物油中多种甾醇的方法，其特征在于：所述S1中离心采用高速冷冻离心机，转速为8000r/min，离心时间为5min。6.根据权利要求1所述的一种同时测定植物油中多种甾醇的方法，其特征在于：所述S1中上清液过滤用0.22μm尼龙滤膜。7.根据权利要求1所述的一种同时测定植物油中多种甾醇的方法，其特征在于：所述S2中液相色谱
‑
质谱联用仪流动相由流动相A和流动相B组成，采用梯度洗脱。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宏萍，李志刚，
申请(专利权)人：王宏萍，
类型：发明
国别省市：