一种构建瓜蒌药材指纹图谱及测定瓜蒌指标性成分含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种构建瓜蒌药材指纹图谱及测定瓜蒌指标性成分含量的方法，包括：取瓜蒌药材制备为供试品溶液；取芦丁、金圣草黄素和葫芦素D制备为对照品溶液；将供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种构建瓜蒌药材指纹图谱及测定瓜蒌指标性成分含量的方法


[0001]本专利技术属于中药质量分析检测
，具体涉及一种构建瓜蒌药材指纹图谱及测定瓜蒌指标性成分含量的方法。

技术介绍

[0002]瓜蒌为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim或双边栝Trichosanthes rosthornii Harms的干燥成熟果实。具有清热涤痰、宽胸散结和润肠等功效。
[0003]瓜蒌主产于山东、河北、安徽等地，在全国大部分地区均有分布。需要采用有效的技术手段对瓜蒌药材质量进行一致性评价，以保证瓜蒌药材的安全有效和质量可控。
[0004]然而，现今尚未建立起对瓜蒌质量进行一致性评价的控制标准。2020版《中国药典》中缺乏对瓜蒌指标性成分含量测定的方法，仅在瓜蒌子和炒瓜蒌子中规定了对3,29
‑
二苯甲酰基栝楼仁三醇的含量要求，目前的研究工作难以有效控制瓜蒌药材的整体质量。
[0005]因此，急需开发一种构建瓜蒌药材指纹图谱和含量测定的方法以应用于瓜蒌药材的质量评价。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一，为此，本专利技术提供了一种构建瓜蒌药材指纹图谱及测定瓜蒌药材指标性成分含量的方法。
[0007]根据本专利技术的一个方面，提供了一种瓜蒌药材指纹图谱的构建方法，包括：取瓜蒌药材制备为供试品溶液；取芦丁、金圣草黄素和葫芦素D制备为对照品溶液；将所述供试品溶液和所述对照品溶液分别注入液相色谱
‑
质谱联用仪，根据液相色谱
‑
质谱联用法，获得所述瓜蒌药材的指纹图谱。
[0008]优选地，所述瓜蒌药材的指纹图谱中，包含11个特征峰，所述特征峰的编号为峰1～峰11；峰4为芦丁、峰10为金圣草黄素、峰11为葫芦素D，LC
‑
MS指纹图谱中所述特征峰及所述特征峰的鉴定如下：
[0009][0010]优选地，以峰10为S峰，峰1～峰9及峰11相对于S峰的相对保留时间范围分别为：0.148～0.152、0.101～0.103、0.310～0.315、0.361～0.368、0.471～0.476、0.574～0.575、0.649～0.652、0.761～0.766、0.847～0.851、1.020～1.025。
[0011]优选地，所述液相色谱
‑
质谱联用法的色谱条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：流动相A为含0.1％体积浓度的甲酸水，流动相B为含0.1％体积浓度的甲酸乙腈溶液；采用梯度洗脱，流速为0.3mL/min。
[0012]优选地，所述色谱柱为CORTECS UPLC T3 Column(2.1
×
100mm,1.6μm)色谱柱。
[0013]优选地，所述梯度洗脱按照以下程序进行：0.0
‑
1.0min，流动相A从85％
→
84％，流动相B从15％
→
16％；1.0
‑
5.5min，流动相A从84％
→
84％，流动相B从16％
→
16％；5.5
‑
6.0min，流动相A从84％
→
77％，流动相B从16％
→
23％；6.0
‑
16.0min，流动相A从77％
→
66％，流动相B从23％
→
34％。
[0014]优选地，所述液相色谱
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质谱联用法的质谱条件包括：离子源为ESI；电离模式为负离子模式；反吹氮气温度325℃，反吹氮气流量11.0L/min，雾化气流量45psi，辅助氮气温度350℃，辅助氮气流量11.0L/min，毛细管电压3500V，源内碰撞电压175V，锥孔电压65.0V；扫描模式：全扫描；扫描范围：m/z 60～1700。
[0015]优选地，所述供试品溶液的制备方法包括：采用第一溶剂对所述瓜蒌药材进行提取、过滤，获得所述供试品溶液。
[0016]优选地，所述供试品溶液的制备方法包括：向100mg所述瓜蒌药材中添加1ml所述第一溶剂；浸泡60分钟后于40kHz、30℃条件下超声提取30分钟；离心后获得第一上清液和第一残渣；向所述第一残渣中继续添加1ml所述第一溶剂；于40kHz、30℃条件下超声提取30分钟；离心后获得第二上清液和第二残渣；合并所述第一上清液和所述第二上清液，获得所
述供试品溶液，其中所述第一溶剂为50％
‑
95％乙醇。
[0017]根据本专利技术的另一个方面，提供了一种瓜蒌药材指标性成分含量的测定方法，包括：取待测瓜蒌药材制备为待测样品溶液；取芦丁、黑麦草内酯、金圣草黄素和葫芦素D制备为对照品溶液；将所述待测样品溶液和所述对照品溶液分别注入液相色谱
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质谱联用仪，根据液相色谱
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质谱联用法，获得所述待测瓜蒌药材的待测图谱和所述对照品溶液的对照图谱；根据所述对照品溶液的浓度、所述对照品溶液在所述对照图谱中的峰面积、以及所述待测瓜蒌药材与所述对照品溶液相对应的成分在所述待测图谱中的峰面积，计算所述待测瓜蒌药材中指标性成分芦丁、黑麦草内酯、金圣草黄素和葫芦素D的含量。
[0018]优选地，所述对照品溶液的浓度与所述对照品溶液在所述对照图谱中的峰面积之间满足以下关系：所述芦丁的第一回归方程为y＝235579.05x+1670.62(r2＝0.9995，权重为1/x)，线性范围为0.025
‑
2.5μg/mL，检测限为0.005μg/mL(S/N≥3)；所述黑麦草内酯的第二回归方程为y＝184480.64x+13364.70(r2＝0.9994，权重为1/x)，线性范围为0.05
‑
5μg/mL，检测限为0.01μg/mL(S/N≥3)；所述金圣草黄素的第三回归方程为y＝493941.66x+48.93(r2＝0.9995，权重为1/x)，线性范围为0.025
‑
2.5μg/mL，检测限为0.005μg/mL(S/N≥3)；所述葫芦素D的第四回归方程为y＝52814.15x
‑
340.56(r2＝0.9997，权重为1/x)，线性范围为0.025
‑
5μg/mL，检测限为0.005μg/mL(S/N≥3)；其中，所述第一回归方程、所述第二回归方程、所述第三回归方程和所述第四回归方程中，横坐标为所述对照品溶液浓度，纵坐标为所述对照图谱中的所述峰面积。
[0019]优选地，所述液相色谱
‑
质谱联用法的色谱条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：流动相A为含0.1％体积浓度的甲酸水，流动相B为含0.1％体积浓度的甲酸乙腈溶液；采用梯度洗脱，流速为0.3mL/min。
[0020]优选地，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
Column(2.1
×
100mm,1.6μm)色谱柱。6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱按照以下程序进行：0.0
‑
1.0min，流动相A从85％
→
84％，流动相B从15％
→
16％；1.0
‑
5.5min，流动相A从84％
→
84％，流动相B从16％
→
16％；5.5
‑
6.0min，流动相A从84％
→
77％，流动相B从16％
→
23％；6.0
‑
16.0min，流动相A从77％
→
66％，流动相B从23％
→
34％。7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述液相色谱
‑
质谱联用法的质谱条件包括：离子源为ESI，电离模式为负离子模式；反吹氮气温度325℃，反吹氮气流量11.0L/min，雾化气流量45psi，辅助氮气温度350℃，辅助氮气流量11.0L/min，毛细管电压3500V，源内碰撞电压175V，锥孔电压65.0V；扫描模式：全扫描；扫描范围：m/z 60～1700。8...

【专利技术属性】
技术研发人员：李娜，卞西清，白国玉，陈晓琳，赵一然，
申请(专利权)人：澳门科技大学，
类型：发明
国别省市：