一种猪胰腺单细胞悬液制备方法及应用技术

本发明专利技术提出了一种猪胰腺单细胞悬液制备方法及应用，其中猪胰腺单细胞悬液制备方法包括如下步骤：S1，取猪胰腺组织，去除表面脂肪，并将组织剪碎；S2，清洗组织碎块，然后将组织放入混合酶解离液中进行第一次消化；S3，第一次消化结束后取上清液，管内剩余组织继续加入混合酶解离液进行第二次消化；S4，第二次消化结束后取上清液，并与步骤S3的上清液合并，过滤；S5，过滤后的解离液离心，弃上清液，重悬细胞沉淀，得到细胞悬液；所述混合酶解离液包括胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ、弹性蛋白酶、脂肪酶、DNaseI、肝素、硫酸钠和DHanks缓冲液。本发明专利技术酶混合液具有去除细胞间质，减少细胞聚团，保护细胞膜形态，减少细胞破损的作用。减少细胞破损的作用。减少细胞破损的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种猪胰腺单细胞悬液制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及细胞生物
，尤其涉及一种猪胰腺单细胞悬液制备方法及应用。

技术介绍

[0002]单细胞测序是指获取单个细胞遗传信息的测序技术，即在单个细胞水平上，对基因组或转录组进行提取扩增和高通量测序分析。该技术能够揭示单个细胞独有的基因结构和基因表达状态，包括结构变异、拷贝数变异、RNA表达水平等数据，使不同细胞类型得以精确区分，并有助于科学家在但细胞水平进行分子机制的研究。
[0003]对于单细胞转录测序的结果来说，影响最大的就是样本的制备。专利号为CN103436487A的专利技术专利公开了胰蛋白酶可以酶解溪蟹细胞，专利号为CN114591883A的专利技术专利公开了胶原酶、透明质酸酶和DNA酶可以酶解主动脉细胞。猪胰腺含有大量的脂肪和纤维成分，导致上述酶在酶解猪胰腺细胞时，细胞容易成团。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提出了一种猪胰腺单细胞悬液制备方法及应用，酶解猪胰腺时，细胞结团率低且单细胞悬液的活率高。
[0005]本专利技术的技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪胰腺单细胞悬液制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1，取猪胰腺组织，去除表面脂肪，并将组织剪碎；S2，清洗组织碎块，然后将组织放入混合酶解离液中进行第一次消化；S3，第一次消化结束后取上清液，管内剩余组织继续加入混合酶解离液进行第二次消化；S4，第二次消化结束后取上清液，并与步骤S3的上清液合并，过筛；S5，过筛后的解离液离心，弃上清液，细胞沉淀经过两次清洗和离心后，DPBS溶液重悬细胞沉淀，得到细胞悬液；所述混合酶解离液包括胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ、弹性蛋白酶、脂肪酶、DNaseI、肝素、硫酸钠和DHanks缓冲液。2.如权利要求1所述的一种猪胰腺单细胞悬液制备方法，其特征在于：所述混合酶解离液包括胰蛋白酶1
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5mg/mL、胶原酶Ⅰ0.5
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3mg/mL、弹性蛋白酶1
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4mg/mL、脂肪酶2
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5mg/mL、DNaseI8
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12mg/mL、肝素2
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6U/mL和硫酸钠3
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6g/L，溶剂为D
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hanks缓冲液。3.如权利要求1所述的一种猪胰腺单细胞悬液制备方法，其特征在于：于冰上将组织剪碎，期...

【专利技术属性】
技术研发人员：李新平，李泽卿，郑婷婷，
申请(专利权)人：武汉远赞吉诺百客医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：