少突胶质细胞祖细胞组合物制造技术

本申请涉及少突胶质细胞祖细胞组合物。提供了包含少突胶质细胞祖细胞(OPC)群的组合物及其制备和使用方法。一方面，提供了含有组合物的容器，其中该组合物包含含有多个OPC的细胞群，并且其中所述细胞群包含少于15％的不期望的细胞类型。另一方面，细胞群包含少于15％的不期望的上皮谱系细胞。另一方面，细胞群包含少于2％的K7阳性细胞。一方面，提供了能够在囊肿试验中形成少于1个上皮囊肿/100，000个细胞的包含多个少突胶质细胞祖细胞的细胞群。本公开的另一方面是包含组合物的容器，其中包含多个少突胶质细胞祖细胞的组合物可用于治疗中风、脊髓损伤、和多发性硬化。脊髓损伤、和多发性硬化。脊髓损伤、和多发性硬化。

【技术实现步骤摘要】
少突胶质细胞祖细胞组合物
[0001]本申请是中国专利申请号201780033497.9的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2016年3月30日提交的题为“少突胶质细胞祖细胞组合物”的美国临时专利申请系列号62/315,454的申请日优先权，其内容通过引用全文纳入本文。


[0004]本公开涉及少突胶质细胞祖细胞的细胞生物学领域。更具体地，本公开涉及包含少突胶质细胞祖细胞的组合物，以及其制备和使用方法。

技术介绍

[0005]当培养多潜能细胞(包括人胚胎干细胞(hESC))时，在其扩增期间可发生不同程度的自发分化。这种自发分化随后可损害hESC经历定向分化成特定细胞类型，包括少突胶质细胞祖细胞(OPC)的能力。例如，先前已显示hESC的H1系在常规培养条件下生长时经过自发分化，具有滋养外胚层谱系分化的倾向(Drukker M，Tang C，Ardehali R，Rinkevich Y，Seita J，Lee AS，Mosley AR，Weissman IL，Soen Y.“从人多潜能干细胞中分离原始内胚层，中胚层，血管内皮和滋养层祖细胞(Isolation of primitive endoderm，mesoderm，vascular endothelial and trophoblast progenitors from human pluripotent stem cells)”，Nat Biotechnol.2012年5月27日；30(6)：531
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42；Wang Z，Oron E，Nelson B，Razis S，Ivanova N.“NANOG、OCT4和SOX2在人胚胎干细胞中的不同谱系规范作用(Distinct lineage specification roles for NANOG，OCT4，and SOX2 in human embryonic stem cells)”，Cell Stem Cell.2012年4月6日；10(4)：440
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54)。这种自发分化部分由hESC内的内源性WNT信号传导调节(Kumar RM，Cahan P，Shalek AK，Satija R，DaleyKeyser AJ，Li H，Zhang J，Pardee K，Gennert D，Trombetta JJ，Ferrante TC，Regev A，Daley GQ，Collins JJ.“解构多潜能干细胞中的转录异质性(Deconstructing transcriptional heterogeneity in pluripotent stem cells)”，Nature.2014年12月4日；516(7529)：56
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61)。然而，该领域在关于WNT途径的激活或抑制是否有益于控制分化方面存在分歧。即，Kurek等表明抑制WNT途径会减少自发分化(Kurek D，Neagu A，Tastemel M，T
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z N，Lehmann J，van de Werken HJ，Philipsen S，van der Linden R，Maas A，van IJcken WF，Drukker M，ten Berge D.“内源性WNT信号介导外胚层干细胞和人胚胎干细胞的BMP诱导的和自发分化(Endogenous WNT signals mediate BMP
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induced and spontaneous differentiation of epiblast stem cells and human embryonic stem cells)”，Stem Cell Reports.2015年1月13日；4(1)：114
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28)。
[0006]当H1 hESC扩增然后定向分化成OPC时，分化细胞表现出滋养外胚层相关基因(包括转录因子)的表达增加。这表明神经外胚层谱系外的细胞类型能够在分化期间持续存在。继而，在分化期间这种非神经外胚层谱系标志物的持续与最终OPC群中不需要的细胞类型，包括例如上皮细胞，软骨细胞祖细胞和视网膜色素上皮细胞相关。
[0007]已经使用几种标志物来量化OPC群中不需要的细胞的水平。即，可以通过细胞表型分析方法如流式细胞术和基因表达谱分析来检测这些标志物。例如，流式细胞术分析可用于基于与上皮细胞相关的标志物的存在来检测不同水平的上皮细胞，包括例如EpCAM，CD49f/ITGA6，E
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钙粘蛋白，细胞角蛋白7(K7)，泛细胞角蛋白(PCK)，CA125/MUC16，内皮素/串珠蛋白聚糖，以及表1中列出的其他标志物。此外，通过定量聚合酶链反应(qPCR)的基因表达分析可用于基于OLR1和RPE65表达指示不同水平的软骨细胞祖细胞和视网膜色素上皮细胞。
[0008]尽管已经努力产生具有低水平的不期望的细胞类型的OPC群，但是诸如细胞分选和抗体消耗的策略是复杂的并且经常需要产生昂贵且不可放大的定制试剂。

技术实现思路

[0009]本公开的一个方面包括包含多个少突胶质细胞祖细胞(OPC)的组合物，以及其制备方法和用于改善需要治疗的对象的一种或多种神经功能的方法。在本公开的一个方面，本公开包括含有细胞群的组合物，所述细胞群包含多个OPC和少于15％的不期望的细胞类型。在本公开的一个方面，本公开还包括实现细胞群的方法，所述细胞群包含多个OPC和少于15％的不期望的细胞类型。在本公开的一个方面，本公开还包括表征细胞群的方法，所述细胞群包含多个OPC和少于15％的不期望的细胞类型。另外，在本公开的一个方面，本公开还包括使用细胞群的方法，所述细胞群包含多个OPC和少于15％的不期望的细胞类型。在本公开的一个方面，本公开还包括产生细胞群的方法，所述细胞群包含多个OPC和少于15％的不期望的细胞类型。
[0010]更具体地，在一个方面，本公开包括含有组合物的容器，其中所述组合物包含含有多个少突胶质细胞祖细胞的细胞群，并且其中所述细胞群包含少于15％的不期望的细胞类型。在某些方面，细胞群包含少于15％的上皮谱系细胞。在某些方面，细胞群包含少于2％的K7阳性细胞。在某些方面，细胞群包含少于5％的K7阳性细胞。
[0011]本公开的一个方面是包含组合物的容器，其中所述组合物包含含有多个少突胶质细胞祖细胞(OPC)的细胞群，并且其中所述多个OPC包含一个或多个干细胞源的体外衍生后代，所述干细胞源选自人胚胎干细胞，灵长类动物多潜能干细胞和诱导多潜能干细胞。
[0012]本公开的另一方面是包含组合物的容器，其中所述组合物包含包含多个少突胶质细胞祖细胞的细胞群，并且其中所述细胞群能够在囊肿试验中形成小于或等于1个上皮囊肿/100000个细胞。在另一方面，在将多至20
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106个细胞植入中枢神经系统损伤部位后，细胞群能够在少于2％的对象中产生异位组织。
[0013]本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含有组合物的容器，其中所述组合物包含含有多个少突胶质细胞祖细胞(OPC)的细胞群，并且其中所述细胞群包含少于15％的不期望的细胞类型。2.如权利要求1所述的容器，其中所述不期望的细胞类型包括上皮谱系细胞。3.如权利要求2所述的容器，其中所述上皮谱系细胞的特征在于存在选自K7和PCK的一个或多个标志物。4.如权利要求3所述的容器，其中所述细胞群包含少于2％的K7阳性细胞。5.如权利要求4所述的容器，其中所述细胞群包含少于0.2％的K7阳性细胞。6.如权利要求3所述的容器，其中所述细胞群包含少于5％的PCK阳性细胞。7.如权利要求1所述的容器，其中所述细胞群具有共同的遗传背景。8.如权利要求7所述的容器，其中所述细胞群未经过细胞富集。9.如权利要求1所述的容器，其中所述容器配置用于冷冻保存。10.一种包含组合物的容器，其中所述组合物包含含有多个少突胶质细胞祖细胞(OPC)的细胞群，并且其中所述细胞群能够在囊肿试验中形成小于或等于1个上皮囊肿/100000个细胞。11.如权利要求10所述的容器，其中所述细胞群能够在12个月或更短的时间内减小损伤诱导的中枢神经系统实质空化的体积。12.如权利要求10所述的容器，其中所述细胞群能够在180天或更短的时间内在对象的中枢神经系统组织中从第一位置迁移到一个或多个第二位置处的一个或多个受影响的组织。13.如权利要求12所述的容器，其中所述中枢神经系统组织是脊髓组织。14.如权利要求12所述的容器，其中所述中枢神经系统组织是脑组织。15.如权利要求10所述的容器，其中所述细胞群能够在将所述群植入对象中后改善需要治疗的对象的运动功能。16.如权利要求15所述的容器，其中所述细胞群能够可持续地改善运动功能持续至少两个月。17.如权利要求15所述的容器，其中所述运动功能是增加的站立能力或重量支撑。18.如权利要求15所述的容器，其中所述运动功能是增加的肢体功能或肢体强度。19.如权利要求15所述的容器，其中所述运动功能是增加的步行距离。20.如权利要求15所述的容器，其中所述运动功能是增加的步行速度。21.如权利要求15所述的容器，其中所述运动功能是增加的肠或膀胱功能。22.如权利要求15所述的容器，其中所述运动功能是增加的手臂或手部运动。23.如权利要求15所述的容器，其中所述运动功能是增加的抓，握，或者紧握。24.如权利要求10所述的容器，其中所述细胞群能够产生一种或多种生物信号传导因子。25.如权利要求24所述的容器，其中所述细胞群能够产生血管生成信号传导因子。26.如权利要求25所述的容器，其中所述血管生成信号传导因子选自血小板反应蛋白
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1，丝抑蛋白1，丝抑蛋白2及其组合。27.如权利要求24所述的容器，其中所述细胞群能够产生神经营养信号传导因子。28.如权利要求27所述的容器，其中所述神经营养因子选自NGF，导蛋白4，肌腱蛋白C，
血小板反应蛋白1，血小板反应蛋白3，SLIT1，SLIT3及其组合。29.如权利要求24所述的容器，其中所述一种或多种生物信号传导因子包括核心蛋白聚糖。30.如权利要求24所述的容器，其中所述一种或多种生物信号传导因子包括中期因子。31.如权利要求10所述的容器，其中所述细胞群能够在对象的植入部位诱导裸露的轴突的髓鞘形成。32.一种含有组合物的容器，其中所述组合物包含含有多个少突胶质细胞祖细胞(OPC)的细胞群，并且其中所述细胞群能够在将多至1
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109个所述细胞植入中枢神经系统损伤部位后，在少于2％的对象中产生异位组织。33.如权利要求32所述的容器，其中所述细胞群能够在将多至1
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109个所述细胞植入中枢神经系统损伤部位后，在少于1％的对象中产生异位组织。34.如权利要求1、10或32所述的容器，其中所述细胞群的至少30％是NG2阳性细胞。35.如权利要求34所述的容器，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：E，
申请(专利权)人：阿斯特利亚斯生物治疗股份公司，
类型：发明
国别省市：