一种用于同时测定内分泌性高血压多种成因标志物的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于同时测定内分泌性高血压多种成因标志物的试剂盒，涉及生物检测领域，所述成因标志物包括醛固酮、血管紧张素I、血管紧张素II、变肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、去甲肾上腺素、去甲变肾上腺素、3

【技术实现步骤摘要】
一种用于同时测定内分泌性高血压多种成因标志物的试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，特别涉及一种用于同时测定内分泌性高血压多种成因标志物的试剂盒。

技术介绍

[0002]继发性高血压是由某些特定病因所引发的，有效去除或控制病因后，作为继发症状的高血压可被治愈或明显缓解。继发性高血压的发生率在5％～10％，以内分泌性高血压最为常见。内分泌激素参与血压的生理调节，如果激素水平发生紊乱，则会导致内分泌疾病的发生。而其中，有些内分泌疾病就伴有血压升高。目前至少有15种与内分泌疾病相关的高血压，包括原发性醛固酮增多症(PA)、嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(PPGL)、库欣综合征(CS)。
[0003]醛固酮(ALD)是一种增进肾脏对于离子及水分子再吸收作用的类固醇类激素；血管紧张素肽原是一种在肝脏中合成的α2球蛋白，血管紧张素肽原在肾素的作用下生成血管紧张素I(Ang I)，血管紧张素Ⅱ(Ang II)是由血管紧张素Ⅰ在血管紧张素转化酶的作用下，水解产生的多肽物质，上述三种激素与原发性醛固酮增多症(PA)的发生具有一定的相关性；嗜铬细胞瘤(PCC)是起源于肾上腺髓质，副神经节瘤(PGL)是起源于肾上腺外的交感神经链并具有激素分泌功能的神经内分泌肿瘤，主要合成、分泌和释放大量儿茶酚胺(CA)。变肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)和多巴胺(DA)都属于儿茶酚胺(CA)，儿茶酚胺是具有较强的生理学活性的内源性物质，能够使血管收缩，去甲肾上腺素(MN)、去甲变肾上腺素(NMN)和3
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甲氧基酪胺(3
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MT)分别为NE、E和DA的中间代谢产物，2020版的《嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊疗专家共识》中推荐将血浆游离或尿MN、NMN浓度测定作为诊断PPGL的实验室检查首选指标，此外指南还建议同时检测NE、E、DA、及其代谢产物3
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MT的浓度以帮助诊断；库欣综合征(CS)又称皮质醇增多症，一般是由于肾上腺皮质分泌糖皮质激素(主要是皮质醇F)过多所致。
[0004]目前，上述几种血浆激素的测定主要采用各种不同免疫分析方法，如放射免疫分析法、荧光定量法、荧光免疫分析法和时间分辨荧光免疫分析法等。由于血液中激素水平相对较低，对检测方法的要求较高，上述方法虽然能够达到一定的准确度，但仍存在不同激素间的交叉反应、灵敏度和特异度相对不高等情况，使检测结果的假阳性率增加，且每种激素的测定须使用不同试剂盒，所需的血液样本量和检测成本较高。而且，目前市售试剂盒一次实验只能检测单一指标，不能实现一次实验同时检测上述10种激素。
[0005]人体内激素种类繁多，浓度差异大，对于检测的技术要求很高。随着质谱技术的快速发展，质谱法因其更高的检测特异性和灵敏度，越来越受到关注，已成为检测激素类物质的金标准并被指南和共识所推荐，虽然现有技术中，公开号为CN113049697A的中国专利文献公开了同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法及试剂盒，公开号为CN115389682A的中国专利文献公开了用于检测血浆和尿液中儿茶酚胺及其代谢产物的试剂盒，公开号为CN114460188A的中国专利文献公开了检测人血浆儿茶酚胺中间代谢物的试剂盒，公开号为CN114280170A的中国专利文献公开了检测人血清中皮质醇浓度的试剂盒，但是上述试剂盒
均不能实现上述10种激素的同时检测。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种用于同时测定醛固酮、血管紧张素、儿茶酚胺及其中间代谢物和皮质醇共10种激素的试剂盒，上述10种激素均属于内分泌性高血压的成因标志物，该试剂盒能够大大增加检测的通量，缩短检测时间，降低检测费用，且检测灵敏度高、专属性强。
[0007]具体采用的技术方案如下：
[0008]一种用于同时测定内分泌性高血压多种成因标志物的试剂盒，所述成因标志物包括醛固酮、血管紧张素I、血管紧张素II、变肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、去甲肾上腺素、去甲变肾上腺素、3
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甲氧基酪胺或皮质醇，所述试剂盒的检测目标物包括所述成因标志物中的至少一种，
[0009]所述试剂盒包括前处理试剂、固相萃取试剂和LC
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MS检测试剂；
[0010]所述前处理试剂包括酶抑制剂和终止剂；
[0011]所述酶抑制剂包括胰蛋白酶抑制剂；
[0012]所述终止剂由甲酸和水组成；
[0013]所述固相萃取试剂包括活化剂、淋洗液、洗脱液和复溶液；
[0014]所述活化剂、淋洗液和洗脱液均由甲醇和/或水组成；
[0015]所述复溶液由甲酸、甲醇和水组成；
[0016]所述LC
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MS检测试剂包括校准品、质控品、内标和流动相；
[0017]所述校准品和质控品均包括醛固酮、血管紧张素I、血管紧张素II、变肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、去甲肾上腺素、去甲变肾上腺素、3
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甲氧基酪胺和皮质醇中的至少一种；
[0018]所述内标为经同位素标记的检测目标物；
[0019]所述流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为甲酸和/或乙酸的水溶液，流动相B为含体积浓度0％～2％甲酸的甲醇溶液和/或含体积浓度0％～2％甲酸的乙腈溶液。
[0020]优选的，所述内标包括醛固酮
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d7、血管紧张素I
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C6,
15
N4、血管紧张素II
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13
C6,
15
N4、变肾上腺素
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d6、肾上腺素
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d6、多巴胺
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d4、去甲肾上腺素
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d3、去甲变肾上腺素
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d3、3
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甲氧基酪胺
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d4和皮质醇
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d4中的至少一种。
[0021]具体的，所述酶抑制剂由醋酸钠缓冲液、乙二胺四乙酸、甲基磺酰氟和胰蛋白酶抑制剂组成；胰蛋白酶抑制剂可有效抑制胰蛋白酶对肾素的酶解作用，使肾素保持活性，从而通过孵育使血管紧张素肽原转化为血管紧张素I。
[0022]优选的，酶抑制剂中，胰蛋白酶抑制剂的浓度为60～140ng/mL，甲基磺酰氟的浓度为2.0～6.0mmol/L，乙二胺四乙酸的浓度为10～25mmol/L。采用该配方的蛋白酶抑制剂孵育样本时，均可获得理想的效果。
[0023]进一步优选的，所述酶抑制剂中，胰蛋白酶抑制剂的浓度为100ng/mL，甲基磺酰氟的浓度为4mmol/L，乙二胺四乙酸的浓度为18mmol/L。
[0024]优选的，所述终止剂中，甲酸与水的体积比为1～5：95～99；进一步优选的，甲酸与水的体积比为3.5：96.5。
[0025]优选的，所述淋洗液中，甲醇和水的体积比为5：95。
[0026]优选的，所述洗脱液中，甲醇的体积比为100％。
[0027]优选的，所述复溶液为含0.1％甲酸的甲醇
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于同时测定内分泌性高血压多种成因标志物的试剂盒，其特征在于，所述成因标志物包括醛固酮、血管紧张素I、血管紧张素II、变肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、去甲肾上腺素、去甲变肾上腺素、3
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甲氧基酪胺或皮质醇，所述试剂盒的检测目标物包括所述成因标志物中的至少一种，所述试剂盒包括前处理试剂、固相萃取试剂和LC
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MS检测试剂；所述前处理试剂包括酶抑制剂和终止剂；所述酶抑制剂包括胰蛋白酶抑制剂；所述终止剂由甲酸和水组成；所述固相萃取试剂包括活化剂、淋洗液、洗脱液和复溶液；所述活化剂、淋洗液和洗脱液均由甲醇和/或水组成；所述复溶液由甲酸、甲醇和水组成；所述LC
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MS检测试剂包括校准品、质控品、内标和流动相；所述校准品和质控品均包括醛固酮、血管紧张素I、血管紧张素II、变肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、去甲肾上腺素、去甲变肾上腺素、3
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甲氧基酪胺和皮质醇中的至少一种；所述内标为经同位素标记的检测目标物；所述流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为甲酸和/或乙酸的水溶液，流动相B为含体积浓度0％～2％甲酸的甲醇溶液和/或含体积浓度0％～2％甲酸的乙腈溶液。2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述内标包括醛固酮
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d7、血管紧张素I
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13
C6,
15
N4、血管紧张素II
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13
C6,
15
N4、变肾上腺素
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d6、肾上腺素
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d6、多巴胺
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d4、去甲肾上腺素
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d3、去甲变肾上腺素
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d3、3
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甲氧基酪胺
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d4和皮质醇
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d4中的至少一种。3.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述酶抑制剂由醋酸钠缓冲液、乙二胺四乙酸、甲基磺酰氟和胰蛋白酶抑制剂组成；酶抑制剂中，胰蛋白酶抑制剂的浓度为60～140ng/mL，甲基磺酰氟的浓度为2.0～6.0mmol/L，乙二胺四乙酸的浓度为10～25mmol/L。4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述终止剂中，甲酸与水的体积比为1～5：95～99。5.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述校准品工作时各物质的目标浓度范围如下：血管紧张素I的浓度为3～600ng/mL；醛固酮和血管紧张素II的浓度为0.05～10ng/mL；变肾上腺素的浓度为0.03～6ng/mL；肾上腺素和去甲肾上腺素的浓度为0.01～2ng/mL；多巴...

【专利技术属性】
技术研发人员：李士敏，郭孟磊，廖煜旸，吴筱丹，王娇娇，方媚，
申请(专利权)人：泽达精准杭州生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：