【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生抗体的方法
[0001]序列表
[0002]本申请含有序列表,所述序列表已经以ASCII格式以电子方式提交并且以全文引用的方式并入本文中。所述ASCII副本创建于2021年8月30日,命名为50474
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237WO2_Sequence_Listing_8_30_21_ST25且大小为65,075个字节。
[0003]本文提供了用于产生和鉴定结合至靶蛋白的期望区域的抗体的方法。
技术介绍
[0004]许多抗体疗法正在进入临床前开发和临床试验阶段。高质量的抗独特型试剂抗体(抗ID)、特别是互补决定区(CDR)特异性抗ID对于治疗性抗体药物开发的生物分析测定至关重要。用于生成这些类型的试剂抗体的常用方法包括体内杂交瘤技术、体外噬菌体展示免疫文库和合成抗体文库。这些技术需要延长的时间线,并且常常会产生数量很少、缺乏表位结合多样性或亲和力弱的抗体组。因此,本领域需要快速产生具有明确定义的表位结合特异性的大量抗ID的方法。
技术实现思路
[0005]一方面,本公开的特征在于一种鉴定一种或多种结合靶蛋白的期望区域的抗体的方法,所述方法包括(a)提供来自已经用包含所述期望区域的靶蛋白或其片段免疫的动物的样品,其中所述样品含有IgG
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B细胞;(b)通过将所述IgG
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B细胞与所述样品中的一种或多种不期望的细胞类型分离来富集所述样品的IgG
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B细胞,其中所述分离包括:(i)使所述样品与结合所述一种或多种不期望的细胞类型的一 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种鉴定结合至靶蛋白的期望区域的一种或多种抗体的方法,所述方法包括:(a)提供来自已经用包含所述期望区域的所述靶蛋白或其片段进行免疫的动物的样品,其中所述样品含有IgG
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B细胞;(b)通过将所述IgG
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B细胞与所述样品中的一种或多种不期望的细胞类型分离来富集所述样品的IgG
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B细胞,其中所述分离包括:(i)使所述样品与结合至所述一种或多种不期望的细胞类型的一种或多种抗体或抗体片段接触,其中所述一种或多种抗体或抗体片段包含标签;以及(ii)使所述样品与对所述标签具有亲和力的表面接触,其中结合至所述一种或多种抗体或抗体片段的所述一种或多种不期望的细胞类型保留在所述表面上,从而将所述IgG
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B细胞与所述一种或多种不期望的细胞类型分离并富集所述样品的IgG
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B细胞;(c)单独培养步骤(b)的分离的IgG
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B细胞;以及(d)鉴定产生结合至所述靶蛋白的所述期望区域的抗体的一种或多种IgG
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B细胞,所述鉴定包括评定步骤(c)的单独培养的IgG
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B细胞的上清液对以下两者的亲和力:(i)包含所述期望区域的所述靶蛋白或其片段;和(ii)包含所述靶蛋白或非靶蛋白的一个或多个不期望的结合位点的对照蛋白;其中对所述靶蛋白或其片段具有亲和力但对所述对照蛋白不具有亲和力的上清液鉴定出产生结合至所述靶蛋白的所述期望区域的抗体的IgG
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B细胞。2.根据权利要求1所述的方法,其中所述动物为兔或大鼠。3.根据权利要求2所述的方法,其中所述动物为兔。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中所述样品为血液样品或血清样品。5.根据权利要求4所述的方法,其中所述血液样品为外周血单核细胞(PBMC)样品。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中所述动物已被免疫约8周。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中所述样品已被处理以去除巨噬细胞和单核细胞。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其中所述不期望的细胞类型为IgM B细胞、骨髓细胞和T细胞中的一种或多种。9.根据权利要求8所述的方法,其中所述不期望的细胞类型为IgM B细胞、骨髓细胞和T细胞。10.根据权利要求8或9所述的方法,其中结合至IgM B细胞的所述一种或多种抗体或抗体片段为结合IgM的一种或多种抗IgM抗体或其抗体片段。11.根据权利要求8或9所述的方法,其中结合至骨髓细胞的所述一种或多种抗体或抗体片段为结合CD11b的一种或多种抗CD11b抗体或其抗体片段。12.根据权利要求8或9所述的方法,其中结合至T细胞的所述一种或多种抗体或抗体片段为结合T淋巴细胞的抗T淋巴细胞抗体或其抗体片段。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法,其中结合至所述一种或多种不期望的细胞类型的所述一种或多种抗体或抗体片段包含生物素标签并且所述表面包含链霉亲和素。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法,其中所述表面为珠。15.根据权利要求14所述的方法,其中所述珠为磁珠。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法,其中步骤(b)进一步包括(iii)使经富集
的样品与包含第一标记物并结合至IgG
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B细胞的抗体或抗体片段和鉴定活细胞的试剂接触。17.根据权利要求16所述的方法,其中结合至IgG
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B细胞的所述抗体或抗体片段为抗IgG抗体。18.根据权利要求16或17所述的方法,其中所述鉴定活细胞的试剂为碘化丙啶。19.根据权利要求16至18中任一项所述的方法,其中步骤(b)(iii)进一步包括使所述样品与包含所述期望区域的所述靶蛋白或其片段接触,其中所述靶蛋白或其片段包含第二标记物。20.根据权利要求19所述的方法,其中步骤(b)(iii)进一步包括使所述样品与包含所述靶蛋白的一个或多个不期望的结合位点的对照蛋白接触,其中所述对照蛋白包含第三标记物。21.根据权利要求20所述的方法,其中所述第一标记物、所述第二标记物和所述第三标记物为荧光标记物。22.根据权利要求20或21所述的方法,其中步骤(b)进一步包括(iv)分离被所述鉴定活细胞的试剂鉴定为活细胞的以及包含所述第一标记物和所述第二标记物但不包含所述第三标记物的细胞。23.根据权利要求22所述的方法,其中所述分离通过多参数荧光激活细胞分选(FACS)进行。24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法,其中,在步骤(d)中,进行ELISA以评定上清液对(i)所述靶蛋白或其片段和(ii)所述对照蛋白两者的亲和力...
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