水稻OsNPR1基因及其在抗水稻黑条矮缩病毒中的应用制造技术

本发明专利技术涉及转基因技术领域及植物病毒病害防治领域，尤其涉及水稻水杨酸途径重要调控因子OsNPR1基因在植物抗水稻黑条矮缩病毒中的应用。的应用。的应用。

【技术实现步骤摘要】
水稻OsNPR1基因及其在抗水稻黑条矮缩病毒中的应用


[0001]本专利技术涉及转基因
及植物病毒病害防治领域，尤其涉及水稻水杨酸途径重要调控因子OsNPR1基因在植物抗水稻黑条矮缩病毒中的应用。

技术介绍

[0002]水稻黑条矮缩病毒(Rice black
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streaked dwarf virus,RBSDV，以下简称RBSDV)隶属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus)。RBSDV是以昆虫灰飞虱为传播介体侵染植物，侵染植物寄主后可以引起植物畸形生长，主要症状表现为植株矮化、分蘖增加叶色深绿以及叶背和茎秆上出现白色瘤状突起等。该病毒在我国长江以南地区主要危害水稻引起水稻黑条矮缩病，在长江以北地区危害玉米引起玉米粗缩病。目前，国内外科学家已对RBSDV基因组序列、病毒蛋白功能以及部分病毒与植物寄主因子互作等方面做了大量的工作。例如：研究表明：RBSDV P5
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1，P6,P9是病毒复制工厂毒质的重要组成部分。P7
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2与S
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.OsNPR1基因在抗斐济病毒属病毒作物育种中的应用，所述基因序列如：SEQ ID NO:1所示。2.权利要求1所述的应用，编码所述OsNPR1基因的蛋白序列如SEQ ID NO:2所示。3.权利要求1
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2任一项所述的应用，所述斐济病毒属(Fijivirus)优选玉米粗缩病毒(Maize Rough Dwarf Virus，MRDV)、水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus，RBSDV)、南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black streaked dwarf virus，SRBSDV)；所述斐济病毒属最优选水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。4.权利要求1
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3任一项所述的应用，所述作物优选水稻，玉米，小麦，燕麦和大麦；更优选水稻，最优选日本晴。5.一种水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)转基因水稻的制备方法，其步骤包括：(1)构建水稻过表达OsNPR1载体设计带有BamHI及SacI酶切位点的引物去扩增权利要求1所述OsNPR1基因；用BamHI、SacI酶对pCV1300载体进行双酶切；酶切位点的引物，用于OsNPR1双元表达载体PCV1300构建，引物序列如下：PCV
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OsNPR1
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F:GTTCCAGATTACGCTGGATCCATGGAGCCGCCGACCAGCCASEQ ID NO:5PCV
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OsNPR1
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R:ATCGGGGAAATTCGAGCTCTCATCTCCTTGGTCGAATGGCSEQ ID NO:6酶切PCV1300载体后，将上述引物扩增PCR产物分别与载体连接；挑选阳性克隆，进行测序确认已成功构建PCV1300
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OsNPR1表达载体；(2)EHA105农杆菌的培养与水稻愈伤组织诱导培养：取
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80℃冰箱保存的含有目基因载体的质粒PCV1300
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OsNPR1转化根瘤农杆菌EHA105；详细的操作步骤如下，首先吸取1μL质粒加到100μL感受态细胞中，吹打混匀，加入4℃提前遇冷的电极杯中，2200V的电压转化，加入500μL无抗性的LB液体培养基，28℃，200rpm培养2
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3h，涂布于含有50μg/ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙宗涛，张合红，魏中艳，李雁军，谢凯丽，陈剑平，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：