一种聚合酶偶联磁珠及其制备方法技术

本申请属于生物检测技术领域，涉及一种聚合酶偶联磁珠及其制备方法，包括磁珠和聚合酶，磁珠通过连接体偶联聚合酶。本申请通过聚合酶和磁珠的结合，可以实现聚合酶通过液体操作进行控制外，还可以通过磁操作，对聚合酶进行控制，操作过程简便，还能够提升聚合扩增检测的准确度和灵敏度。测的准确度和灵敏度。测的准确度和灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种聚合酶偶联磁珠及其制备方法


[0001]本申请涉及生物检测
，尤其涉及一种聚合酶偶联磁珠及其制备方法。

技术介绍

[0002]目前，依赖核酸(DNA和RNA)的聚合酶扩增检测系统中，聚合酶只能通过液体操作进行控制。在微流控里面，控制液体，需要通过压力、阀、定量设计等，才能控制液体，同时控制装置需要直接接触液体。控制过程繁琐复杂，控制参数难以设置，使得聚合酶难以操控，进而影响扩增检测的准确度和灵敏度。

技术实现思路

[0003]本申请实施例的目的在于提出一种聚合酶偶联磁珠及其制备方法，以解决相关技术中依赖核酸的聚合酶扩增检测操作繁琐，检测准确度和灵敏度较差的技术问题。
[0004]为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种聚合酶偶联磁珠，包括磁珠和聚合酶，所述磁珠通过连接体偶联所述聚合酶。
[0005]进一步的，所述连接体为鼠源性抗酶抗体和核酸适体中的一种时，所述鼠源性抗酶抗体或所述核酸适体与所述磁珠共价连接，所述鼠源性抗酶抗体或所述核酸适体与所述聚合酶特异性性结合。
[0006]进一步的，所述连接体包括第一连接体和第二连接体，所述第一连接体与所述磁珠共价连接，所述第一连接体与所述第二连接体特异性结合，所述第二连接体与所述聚合酶特异性结合；
[0007]其中，所述第一连接体为抗鼠性抗体；所述第二连接体为鼠源性抗酶抗体和核酸适体中的一种。
[0008]进一步的，所述连接体包括第一连接体、第二连接体、第一标记物和与所述第一标记物配对的第二标记物，所述第一标记物与所述磁珠共价连接，所述第一标记物与所述第二标记物特异性结合；
[0009]所述第二标记物与所述第一连接体特异性结合，所述第一连接体与所述第二连接体特异性结合，所述第二连接体与所述聚合酶特异性结合；和/或
[0010]所述第一标记物和所述第二标记物分别独立地选自生物素、链霉亲和素、地高辛和抗地高辛抗体中的一种；和/或
[0011]所述第一连接体为抗鼠性抗体；所述第二连接体为鼠源性抗酶抗体和核酸适体中的一种。
[0012]进一步的，所述第一标记物选自生物素时，所述第二标记物选自链霉亲和素；或
[0013]所述第一标记物选自链霉亲和素时，所述第二标记物选自生物素；或
[0014]所述第一标记物选自地高辛时，所述第二标记物选自抗地高辛抗体；或
[0015]所述第一标记物选自抗地高辛抗体时，所述第二标记物选自地高辛。
[0016]为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种聚合酶偶联磁珠的制备方法，采
用了如下所述的技术方案：
[0017]将磁珠通过连接体与聚合酶结合，制得聚合酶偶联磁珠。
[0018]进一步的，所述连接体为鼠源性抗酶抗体和核酸适体中的一种时，所述将磁珠通过连接体与聚合酶结合，制得聚合酶偶联磁珠的步骤包括：
[0019]将所述磁珠与所述鼠源性抗酶抗体或所述核酸适体共价结合，得到共价磁珠；
[0020]将所述共价磁珠与所述聚合酶结合，通过所述共价磁珠上的所述鼠源性抗酶抗体或所述核酸适体与所述聚合酶进行特异性免疫反应，制得聚合酶偶联磁珠。
[0021]进一步的，所述连接体包括第一连接体和第二连接体，所述将磁珠通过连接体与聚合酶结合，制得聚合酶偶联磁珠的步骤包括：
[0022]将所述磁珠与第一连接体共价结合，得到共价磁珠；
[0023]将所述第二连接体与所述聚合酶进行特异性免疫反应，生成第二连接体
‑
聚合酶复合体；
[0024]将所述共价磁珠与所述第二连接体
‑
聚合酶复合体结合，通过所述共价磁珠上的所述第一连接体与所述第二连接体
‑
聚合酶复合体上的所述第二连接体进行特异性免疫反应，制得聚合酶偶联磁珠；
[0025]其中，所述第一连接体为抗鼠性抗体；所述第二连接体为鼠源性抗酶抗体和核酸适体中的一种。
[0026]进一步的，所述连接体包括第一连接体、第二连接体、第一标记物和与所述第一标记物配对的第二标记物，所述将磁珠通过连接体与聚合酶结合，制得聚合酶偶联磁珠的步骤包括：
[0027]使用所述第一标记物标记所述磁珠，得到标记磁珠；
[0028]将所述标记磁珠和使用所述第二标记物标记的所述第一连接体进行特异性免疫结合，制得磁珠
‑
第一连接体复合体；
[0029]将所述第二连接体与所述聚合酶进行特异性免疫反应，生成第二连接体
‑
聚合酶复合体；
[0030]将所述磁珠
‑
第一连接体复合体和所述第二连接体
‑
聚合酶复合体结合，通过所述磁珠
‑
第一连接体复合体的所述第一连接体与所述第二连接体
‑
聚合酶复合体的所述第二连接体进行特异性免疫反应，制得聚合酶偶联磁珠；
[0031]其中，所述第一标记物和所述第二标记物分别独立地选自生物素、链霉亲和素、地高辛和抗地高辛抗体中的一种；和/或
[0032]所述第一连接体为抗鼠性抗体；所述第二连接体为鼠源性抗酶抗体和核酸适体中的一种。
[0033]进一步的，在所述将磁珠通过连接体与聚合酶结合，制得聚合酶偶联磁珠的步骤之后还包括：
[0034]配制PCR反应液，所述PCR反应液包括PCR缓冲液、dNUTP、上游引物、下游引物、探针、UNG酶和所述聚合酶偶联磁珠；
[0035]添加纯化水至所述PCR反应液中，加入核酸样品进行PCR扩增反应，得到扩增结果；
[0036]根据所述扩增结果确定所述聚合酶偶联磁珠的活性。
[0037]与现有技术相比，本申请主要有以下有益效果：
[0038]1、通过聚合酶和磁珠的结合，可以实现聚合酶通过液体操作进行控制外，还可以通过磁操作，对聚合酶进行控制，操作过程简便；
[0039]2、固定在磁珠上的聚合酶，可以通过连接磁珠和聚合物的聚合酶连接物的热属性，通过调节温度，在高温时，聚合酶连接物可逆或不可逆的失去生物学活性，从而使聚合酶得以释放，发挥其聚合活性等生物功能，提升聚合扩增检测的准确度和灵敏度；
[0040]3、固定在磁珠上的聚合酶，因其固定作用及其聚合酶连接物的热属性，在低温时，让聚合酶具有热启动功能，因固定化导致碰撞机率降低，对非特异有更好的抑制作用；
[0041]4、固定在磁珠上的聚合酶，因具备磁操作控制功能，在微流控或POCT上应用上，可以将液路控制转换为磁控制，可以降低微流控的设计难度；
[0042]5、固定在磁珠上的聚合酶，因具备磁操作控制功能，在微流控或POCT设计上，实现酶与反应液的分离，能够解决酶与反应液存放的保存条件和保存温度的问题。
附图说明
[0043]为了更清楚地说明本申请中的方案，下面将对本申请实施例描述中所需要使用的附图作一个简单介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种聚合酶偶联磁珠，其特征在于，包括：磁珠和聚合酶，所述磁珠通过连接体偶联所述聚合酶。2.根据权利要求1所述的聚合酶偶联磁珠，其特征在于，所述连接体为鼠源性抗酶抗体和核酸适体中的一种时，所述鼠源性抗酶抗体或所述核酸适体与所述磁珠共价连接，所述鼠源性抗酶抗体或所述核酸适体与所述聚合酶特异性性结合。3.根据权利要求1所述的聚合酶偶联磁珠，其特征在于，所述连接体包括第一连接体和第二连接体，所述第一连接体与所述磁珠共价连接，所述第一连接体与所述第二连接体特异性结合，所述第二连接体与所述聚合酶特异性结合；其中，所述第一连接体为抗鼠性抗体；所述第二连接体为鼠源性抗酶抗体和核酸适体中的一种。4.根据权利要求1所述的聚合酶偶联磁珠，其特征在于，所述连接体包括第一连接体、第二连接体、第一标记物和与所述第一标记物配对的第二标记物，所述第一标记物与所述磁珠共价连接，所述第一标记物与所述第二标记物特异性结合；所述第二标记物与所述第一连接体特异性结合，所述第一连接体与所述第二连接体特异性结合，所述第二连接体与所述聚合酶特异性结合；和/或所述第一标记物和所述第二标记物分别独立地选自生物素、链霉亲和素、地高辛和抗地高辛抗体中的一种；和/或所述第一连接体为抗鼠性抗体；所述第二连接体为鼠源性抗酶抗体和核酸适体中的一种。5.根据权利要求4所述的聚合酶偶联磁珠，其特征在于，所述第一标记物选自生物素时，所述第二标记物选自链霉亲和素；或所述第一标记物选自链霉亲和素时，所述第二标记物选自生物素；或所述第一标记物选自地高辛时，所述第二标记物选自抗地高辛抗体；或所述第一标记物选自抗地高辛抗体时，所述第二标记物选自地高辛。6.一种聚合酶偶联磁珠的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：将磁珠通过连接体与聚合酶结合，制得聚合酶偶联磁珠。7.根据权利要求6所述的聚合酶偶联磁珠的制备方法，其特征在于，所述连接体为鼠源性抗酶抗体和核酸适体中的一种时，所述将磁珠通过连接体与聚合酶结合，制得聚合酶偶联磁珠的步骤包括：将所述磁珠与所述鼠源性抗酶抗体或所述核酸适体共价结合，得到共价磁珠；将所述共价磁珠与所述聚合酶结合，通过所述共价磁珠上的所述鼠源性抗酶抗体或所述核酸适体与所述聚合酶进行特异性免疫反应，制得聚合酶偶联磁珠。8.根据权利要求6所述的聚合酶偶联磁珠的制备方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘伟，
申请(专利权)人：深圳市博德致远生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：