基于CRISPR/Cas9的人源化ATXN3基因敲入小鼠模型的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR/Cas9的人源化ATXN3基因敲入小鼠模型的构建方法及应用。本发明专利技术通过gRNA和Cas9核酸酶直接对小鼠受精卵进行定点基因编辑，引导更高效率的同源重组，在小鼠Atxn3基因1号外显子处定点敲入了合成的ATXN3

【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR/Cas9的人源化ATXN3基因敲入小鼠模型的构建方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及一种基于CRISPR/Cas9的人源化ATXN3基因敲入小鼠模型的构建方法及应用。

技术介绍

[0002]遗传性脊髓小脑性共济失调(spinocerebellar ataxias，SCAs)是一类临床和遗传异质性较高的遗传性神经退行性疾病，其患病率约为0
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5.6/10万。目前已报道了49种SCA亚型，其中以脊髓小脑性共济失调3型(又称马查多
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约瑟夫病)(spinocerebellar ataxia type 3/Machado
‑
Joseph disease，SCA3/MJD，以下简称SCA3)最为常见，约占中国所有SCAs的60
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70％。
[0003]SCA3由位于14q32区域的ATXN3基因10号外显子内CAG三核苷酸重复序列异常扩增所致。正常人群中CAG重复序列拷贝数为12
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44次，而在SCA3患者中为52<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR/Cas9的人源化ATXN3基因敲入小鼠模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：目的基因序列及重组质粒的合成：构建含96次CAG三核苷酸重复的目的ATXN3
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96Q
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CDS序列，ATXN3
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96Q
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CDS序列如SEQ ID NO.1所示；将合成的目的基因序列导入质粒载体，构建重组质粒，将验证正确的重组质粒作为donor载体；设计5
’
端和3
’
端的两条gRNA序列：5
’
端gRNA序列如SEQ ID NO.2所示，3
’
端g...

【专利技术属性】
技术研发人员：江泓，龚依晴，陈召，万林林，裘嵘，唐北沙，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：