一种提高双子叶植物单碱基编辑器编辑效率的方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种提高双子叶植物胞嘧啶至胸腺嘧啶单碱基器编辑效率的方法及其应用，属于生物技术领域。所述方法为在基于CRISPR/Cas9n的双子叶植物胞嘧啶至胸腺嘧啶单碱基编辑器系统中，将UGI数量增加为2个，将sgRNA scaffold第5个碱基T点突成C、同时延长其茎环结构，将nCas9与PmCDA1之间的linker序列替换为ssDBD结构域序列，并将nCas9替换为nCas9变体，进而提高编辑效率。本发明专利技术所提供的方法有助于包括大豆在内的双子叶植物的功能基因组研究和分子育种。研究和分子育种。

【技术实现步骤摘要】
一种提高双子叶植物单碱基编辑器编辑效率的方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种提高双子叶植物胞嘧啶（C）至胸腺嘧啶（T）单碱基编辑器编辑效率的方法及其在功能基因组研究和分子育种中的应用。

技术介绍

[0002]大豆（Glycine max）是最重要的作物之一，在我国有悠久的种植历史，有着丰富的植物蛋白与油分含量，其在中国农业发展过程中占有重要地位。开展大豆的功能解析、调控表达等方面研究，对大豆的种质改良、抗逆增产、食品安全等方面都具有重大意义。其中获得有关目的基因的突变体材料是大豆功能研究及新种质改良应用的关键步骤，目前传统大豆突变体获得的方法有天然诱变、化学诱变、物理诱变等，但其中存在周期长、投入大、效率低等缺点。随着科技革新，基因编辑的出现为实现精准突变提供了可能，同时大大缩短了育种年限，给种质改良提供了新思路。
[0003]基因编辑技术是利用基因工程表达的序列特异性核酸酶对基因组进行切割，实现基因定点编辑的技术，其可产生插入、敲除、替换、定点突变等，现已广泛应用于医学疾病治疗、多个物种培育如水稻、玉米、大豆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高双子叶植物单碱基编辑器编辑效率的方法，其特征在于：在双子叶植物单碱基编辑器系统中，对其中的尿嘧啶糖基化酶抑制剂、sgRNA scaffold、连接肽及Cas9蛋白进行改造，进而提高编辑效率；所述的单碱基编辑器系统为基于CRISPR/Cas9n的胞嘧啶至胸腺嘧啶单碱基编辑器系统，碱基序列如SEQ ID NO.7 所示；所述的对尿嘧啶糖基化酶抑制剂进行改造是指对尿嘧啶糖基化酶抑制剂的数量进行改造；所述的对sgRNA scaffold进行改造是指对sgRNA scaffold的茎环结构及第5位的碱基进行改造；所述的对连接肽进行改造是指将nCas9与PmCDA1之间的linker序列替换为ssDBD结构域序列；所述的对Cas9蛋白进行改造是指将nCas9替换为nCas9变体。2.根据权利要求1所述的提高双子叶植物胞嘧啶至胸腺嘧啶单碱基编辑效率的方法，其特征在于：所述的双子叶植物为大豆。3.根据权利要求1所述的提高双子叶植物胞嘧啶至胸腺嘧啶单碱基编辑效率的方法，其特征在于：所述的对尿嘧啶糖基化酶抑制剂的数量进行改造具体为将尿嘧啶糖基化酶抑制剂的数量由1个增加为2个。4.根据权利要求1所述的提高双子叶植物胞嘧啶至胸腺嘧啶单碱基编辑效率的方法，其特征在于：所述的对sgRNA scaffold的茎环结构及第5位的碱基进行改造具体为将sgRNA scaffold第5个碱基T点突成C，同时在第12个碱基后添加“TGCTG”、并在第16个碱基后添加“CAGCA”...

【专利技术属性】
技术研发人员：关跃峰，柏梦焱，胡欣晨，钟祥斌，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：