CRISPRa介导的间充质干细胞制备胰岛素分泌细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种胰岛素分泌细胞的制备方法，所述的制备方法包括激活间充质干细胞中的内源转录因子Pdx1、NeuroD1和/或Pax4的表达，使间充质干细胞跨胚层分化，获得的胰岛素分泌细胞可以高效分泌胰岛素。且，所述的制备方法，不需要化学诱导。不需要化学诱导。

【技术实现步骤摘要】
CRISPRa介导的间充质干细胞制备胰岛素分泌细胞的方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学和细胞生物学交叉
，具体涉及CRISPRa介导的脐带间充质干细胞制备胰岛素分泌细胞的方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种胰岛素相对或绝对不足的代谢性疾病。国际糖尿病联盟(International Diabetes Federation,IVD)预测到2045年，世界范围内的糖尿病患者将达到7亿人。目前，虽然胰腺或胰岛移植是能从根本上治疗糖尿病的手段，但器官供体严重不足使得临床应用受限，因此直接移植胰岛素分泌细胞(胰岛β细胞)成为了可行性替代选择。而胰岛β细胞直接来源的困难，使得干细胞体外诱导为胰岛素分泌细胞后再移植成为了替代性方案。脐带间充质干细胞因其来源相对充足、增殖及分化潜能、免疫原性低、遗传稳定和无伦理争议等优势成为用于诱导胰岛素分泌细胞的最佳选择。
[0003]传统的胰岛素分泌细胞诱导方法是化学诱导法，虽然诱导方案在不断优化和完善，但因为脐带间充质干细胞诱导成为胰岛素分泌细胞属于跨胚层分化，化学诱导法的操作程序仍很复杂且效本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胰岛素分泌细胞的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括激活间充质干细胞中的内源转录因子Pdx1、NeuroD1和/或Pax4的表达。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的间充质干细胞来源于人或非人动物的脐带、骨髓、脐血或脂肪。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括向间充质干细胞中导入载体系统，所述的载体系统包括：A)表达一个或多个sgRNA和MS2结合位点的载体，或一个或多个表达sgRNA和MS2结合位点的载体；B)表达融合蛋白MS2
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HSF1的载体；以及，C)表达dCas9蛋白的载体。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的载体为病毒载体，优选为慢病毒载体。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其中，靶向Pdx1基因的sgRNA的靶位点序列包含SEQ ID NO：5
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8中任一项或其组合，靶向NeuroD1基因的sgRNA的靶位点序列包含SEQ ID NO：9
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘俊，王旭，林文龙，桂智，
申请(专利权)人：深圳市沃英达生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：