表达FcγRIIIa和NFAT-Luc报告基因的Jurkat细胞的构建方法及应用技术

本发明专利技术提供一种表达FcγRIIIa和NFAT

【技术实现步骤摘要】
表达Fc
γ
RIIIa和NFAT
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Luc报告基因的Jurkat细胞的构建方法及应用


[0001]本专利技术专利涉及一种表达FcγRIIIa和NFAT
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Luc报告基因的Jurkat细胞的构建方法、构建的细胞及应用，属于生物


技术介绍

[0002]抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（Antibody
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dependent cell
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mediated cytotoxicity, ADCC）是免疫系统对抗病毒感染及肿瘤疾病的一种重要免疫防御机制，是指表达Fc受体的免疫细胞通过识别抗体的Fc段直接杀伤与抗体特异性结合的靶细胞的作用。抗体通过与靶细胞表面抗原特异性结合，招募如自然杀伤（Natural killer, NK）细胞等效应细胞杀死靶细胞。NK细胞表面表达FcγRIIIa蛋白，是一种抗体Fc区域的受体，能识别并结合抗体的Fc端，从而使NK细胞结合到靶细胞周围。一旦Fc受体与抗体的Fc区域结合，NK细胞就会释放细胞因子和细胞毒性颗粒，进入靶细胞触发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表达FcγRIIIa和NFAT
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Luc报告基因的Jurkat细胞的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1) 构建NFAT
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Luc的慢病毒表达质粒载体，以及FcγRIIIa 的慢病毒表达质粒载体，其中FcγRIIIa基因序列如SEQ ID No.2所示；(2) 将步骤(1)中所述的两种慢病毒表达质粒载体配合慢病毒包装质粒分别转染至293v细胞中，获得携带有FcγRIIIa或NFAT
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Luc的病毒颗粒；(3) 用携带FcγRIIIa的病毒颗粒感染Jurkat细胞；(4) 对流式细胞仪筛选得到的阳性细胞株进行博来霉素加压筛选；(5)用携带NFAT
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Luc的病毒颗粒感染步骤（4）筛选出的Jurkat细胞；(6)对流式细胞仪筛选得到的阳性细胞株进行嘌呤霉素加压筛选；(7) 加压筛选后的细胞进行单克隆化，筛选出单克隆阳性细胞株。2.根据权利要求1所述的表达FcγRIIIa和NFAT
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Luc报告基因的Jurkat细胞的构建方法，其特征在于：步骤（2）中慢病毒包装质粒为psPAX2和pMD2.G，慢病毒表达质粒载体：psPAX2：pMD2.G的质量比为1:1:1。3.根据权利要求1所述的表达FcγRIIIa和NFAT
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Luc报告基因的Jurkat细胞的构建方法，其特征在于：步骤(2)中所述转染的方式为化学转染法，所用转染试剂为阳离子聚合物PEI，具体包括如下步骤；（1）转染前一天按5E6 cells进行10 cm Dish铺板，培养基为含10% FBS DMEM，接种细胞24 h后，293v细胞的汇合度为75%
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85%；（2）转染前4小时，将细胞培养基换为5 ml的无血清DMEM；（3）将10 μg质粒DNA 与0.5 mL DMEM混匀后，加入20 μL PEI（PEI:DNA=2:1）转染试剂，涡旋混匀10 秒，室温静置15 min，形成DNA
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PEI 复合物；（4）将转染复合物加入到无血清培养基细胞中，轻轻混匀，于37℃，5% CO2培养箱中培养；（5）转染结束4 h后换成10 mL含10% FBS D...

【专利技术属性】
技术研发人员：易红飞，孙玲玲，朱贺，
申请(专利权)人：翌圣生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：