一种辅助鉴定白菜耐热性的方法及其使用的A06-14144455位点技术

本发明专利技术公开了一种辅助鉴定白菜耐热性的方法及其使用的A06

【技术实现步骤摘要】
一种辅助鉴定白菜耐热性的方法及其使用的A06
‑
14144455位点


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种辅助鉴定白菜耐热性的方法及其使用的A06
‑
14144455位点，A06
‑
14144455位点为白菜基因组中SEQ ID NO:1自5
’
末端起第101位的核苷酸。

技术介绍

[0002]白菜原产我国，是我国种植面积最大、产量最高的蔬菜作物之一。“周年生产供应”已成为白菜产业发展的重大需求，然而白菜性喜冷凉，最适生长温度为15
‑
20℃。当气温超过25℃时，往往表现出幼苗徒长、叶片易变黄、植株纤弱、病毒病严重、苦味、粗纤维含量增加，结球白菜抱球难等现象，这给春夏白菜生产带来极大困难。随着分子生物学和生物信息学的不断发展，发掘与分离不同来源的抗逆主效QTL、挖掘与耐热基因或QTL连锁的分子标记，并通过分子设计育种进行高效聚合，选育稳定、持久的抗逆品种，成为培育高抗优质大白菜品种的有效途径之一。
[0003]分子标记是在DNA水平上对目标性状进行选择，具有高效、快速、不受环境影响等优点，可以在幼苗期进行选择，加快育种过程，当前已经开发了一系列与白菜耐热相关的分子标记。郑晓鹰等用同工酶及RAPD和AFLP分子标记技术鉴定了与大白菜耐热性相关的遗传标记，获得了9个与耐热性QTL紧密连锁的分子标记。于栓仓等应用352个标记位点的大白菜AFLP和RAPD图谱，采用复合区间作图法对控制大白菜耐热性的数量性状基因位点(QTL)进行定位，用苗期热害指数进行耐热性表型鉴定共检测到5个耐热性QTL位点。李停停首次利用SRAP分子标记的方法进行了大白菜耐热性状的分子标记研究，获得的标记和耐热基因之间的交换值为16.7％，说明两者之间连锁较紧密。
[0004]SNP属于新一代分子标记，是指在染色体基因组水平上单个核苷酸的变异引起的DNA序列多态性。与第一、二代分子标记不同，SNP具有分布密度高、遗传稳定性好、二等位基因型等特点。不同物种全基因组的序列测定及比较表明，SNP遗传分析或基因诊断时的重现性、准确性及稳定性都优于SSR。当前，SNP分子标记在白菜耐热性筛选上鲜有报道，因此开发与白菜耐热相关的SNP分子标记具有重要意义。
[0005]KASP(Kompetitive Allele Specific PCR)即竞争性等位基因特异性PCR，是用于SNP分型的常用方法，具有高稳定性、准确性和低成本的特点，已被广泛应用于高通量分子辅助育种和品种鉴定。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是辅助鉴定待测白菜的耐热性。
[0007]本专利技术首先保护引物组。所述引物组可由上游引物A06
‑
14144455
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X、上游引物A06
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14144455
‑
Y和下游引物A06
‑
14144455
‑
C组成；
[0008]所述上游引物A06
‑
14144455
‑
X可由荧光标签序列甲和SEQ ID NO:2自5
’
末端起第
21至51位所示的DNA片段组成；
[0009]所述上游引物A06
‑
14144455
‑
Y可由荧光标签序列乙和SEQ ID NO:3自5
’
末端起第22至52位所示的DNA片段组成；
[0010]所述下游引物A06
‑
14144455
‑
C的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0011]所述引物组中，荧光标签序列甲的核苷酸序列可如SEQ ID NO:2自5
’
末端起第1至20位所示。所述荧光标签序列乙的核苷酸序列可如SEQ ID NO:3自5
’
末端起第1至21位所示。
[0012]本专利技术还保护上述任一所述引物组的应用，可为如下b1)
‑
b3)中的任一种：
[0013]b1)辅助鉴定待测白菜的耐热性；
[0014]b2)辅助筛选具有或疑似具有耐热性的白菜品种；
[0015]b3)白菜育种。
[0016]本专利技术还保护SEQ ID NO:1的DNA片段1或SEQ ID NO:1自5
’
末端起第71
‑
140位所示的DNA片段2的应用，可为如下b1)
‑
b4)中的任一种：
[0017]b1)辅助鉴定待测白菜的耐热性；
[0018]b2)辅助筛选具有或疑似具有耐热性的白菜品种；
[0019]b3)白菜育种。
[0020]b4)作为辅助鉴定待测白菜的耐热性的分子标记。
[0021]本专利技术还保护一种辅助鉴定白菜耐热性的方法，可包括如下步骤：检测待测白菜基于A06
‑
14144455位点的基因型，然后进行如下判断：
[0022]如果待测白菜基于A06
‑
14144455位点的基因型为TT纯合型或CT杂合型，则待测白菜具有或疑似具有耐热性；
[0023]如果待测白菜基于A06
‑
14144455位点的基因型为CC纯合型，则待测白菜不具有或疑似不具有耐热性；
[0024]A06
‑
14144455位点为白菜基因组中SEQ ID NO:1自5
’
末端起第101位的核苷酸。
[0025]上述方法中，所述检测待测白菜基于A06
‑
14144455位点的基因型的步骤可如下：
[0026](1)以待测白菜的基因组DNA为模板，采用上述任一所述引物组进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
[0027](2)完成步骤(1)后，采用仪器检测PCR扩增产物的荧光信号，根据荧光信号的颜色获得待测白菜基于A06
‑
14144455位点的基因型。
[0028]上述方法中，所述检测待测白菜基于A06
‑
14144455位点的基因型的步骤可如下：
[0029](1)以待测白菜的基因组DNA为模板，采用上述任一所述引物组进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
[0030](2)取步骤(1)得到的PCR扩增产物，测序；
[0031](3)根据步骤(2)得到的测序结果，获得待测白菜基于A06
‑
14144455位点的基因型。
[0032]本专利技术还保护一种试剂盒。所述试剂盒包括检测待测白菜基于A06
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14144455位点的基因型的物质；
[0033]A06
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14144455位点可为白菜基因组中SEQ ID NO:1自5
’
末端起第101位的核苷酸。
[0034]所述试剂盒具体可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.引物组，由上游引物A06
‑
14144455
‑
X、上游引物A06
‑
14144455
‑
Y和下游引物A06
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14144455
‑
C组成；所述上游引物A06
‑
14144455
‑
X由荧光标签序列甲和SEQ ID NO:2自5
’
末端起第21至51位所示的DNA片段组成；所述上游引物A06
‑
14144455
‑
Y由荧光标签序列乙和SEQ ID NO:3自5
’
末端起第22至52位所示的DNA片段组成；所述下游引物A06
‑
14144455
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C的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。2.如权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述荧光标签序列甲的核苷酸序列如SEQ ID NO:2自5
’
末端起第1至20位所示。所述荧光标签序列乙的核苷酸序列如SEQ ID NO:3自5
’
末端起第1至21位所示。3.权利要求1或2所述引物组的应用，为如下b1)
‑
b3)中的任一种：b1)辅助鉴定待测白菜的耐热性；b2)辅助筛选具有或疑似具有耐热性的白菜品种；b3)白菜育种。4.SEQ ID NO:1的DNA片段1或SEQ ID NO:1自5
’
末端起第71
‑
140位所示的DNA片段2的应用，为如下b1)
‑
b4)中的任一种：b1)辅助鉴定待测白菜的耐热性；b2)辅助筛选具有或疑似具有耐热性的白菜品种；b3)白菜育种。b4)作为辅助鉴定待测白菜的耐热性的分子标记。5.一种辅助鉴定白菜耐热性的方法，包括如下步骤：检测待测白菜基于A06
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14144455位点的基因型，然后进行如下判断：如果待测白...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏同兵，郑美，于拴仓，张凤兰，余阳俊，张德双，赵岫云，汪潍红，李佩荣，辛晓云，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：