TK基因缺失的重组猪伪狂犬病毒和其感染性克隆系统、构建方法及应用技术方案

本发明专利技术属于病毒基因工程技术领域，公开了TK基因缺失的重组猪伪狂犬病毒（PRV）的感染性克隆系统，所述感染性克隆系统包括5个Fosmid，分别为Fos

【技术实现步骤摘要】
TK基因缺失的重组猪伪狂犬病毒和其感染性克隆系统、构建方法及应用


[0001]本专利技术属于病毒基因工程
，涉及TK基因缺失的重组猪伪狂犬病毒和其感染性克隆系统、构建方法及应用。

技术介绍

[0002]猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)是一种有囊膜的双链DAN病毒，基因组长约143kb，属于疱疹病毒科(Herpesviridae)、α
‑
疱疹病毒亚科(Alphaherpesvirinae)。PRV宿主范围广，包括猪、牛、羊、犬、猫以及多种野生动物，其中PRV感染猪可导致仔猪共济失调和大量死亡、妊娠母猪流产和死胎、公猪不育等严重危害。
[0003]PRV弱毒疫苗是防控猪伪狂犬病的有效措施，其中Bartha
‑
K61是经典的弱毒疫苗株。由于PRV具有复制非必需区多、可容纳大量外源基因、体外易培养等特点，使得PRV成为了一种有潜力的病毒载体。但是，尽管临床实践中表明PRV Bartha
‑
K61对猪是安全的，对小鼠却高度致死的，这不利于在载体开发中的小动物模本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.TK基因缺失的重组猪伪狂犬病毒感染性克隆系统，其特征在于，所述感染性克隆系统包括5个Fosmid粘粒，分别为Fos
‑
Bartha
‑
1、Fos
‑
Bartha
‑2‑
dTK、Fos
‑
Bartha
‑3‑
dTK、Fos
‑
Bartha
‑
4和Fos
‑
Bartha
‑
5，其中Fos
‑
Bartha
‑2‑
dTK和Fos
‑
Bartha
‑3‑
dTK是通过将Fos
‑
Bartha
‑
2和Fos
‑
Bartha
‑
3中的TK基因缺失得来；所述Fos
‑
Bartha
‑
1在猪伪狂犬病毒疫苗株基因组的位置是第1~33021bp，所述Fos
‑
Bartha
‑
2在猪伪狂犬病毒疫苗株基因组的位置是第27809~64672bp，所述Fos
‑
Bartha
‑
3在猪伪狂犬病毒疫苗株基因组的位置是第56119~90917bp，所述Fos
‑
Bartha
‑
4在猪伪狂犬病毒疫苗株基因组的位置是第77241~108242bp，所述Fos
‑
Bartha
‑
5在猪伪狂犬病毒疫苗株基因组的位置是第100085~2080bp；所述猪伪狂犬病毒疫苗株为Bartha
‑
K61。2.根据权利要求1所述的TK基因缺失的重组猪伪狂犬病毒感染性克隆系统，其特征在于，所述Fos
‑
Bartha
‑
2和Fos
‑
Bartha
‑
3中的TK基因的第19~21位碱基由TAC突变为TAA，第28~30位碱基由TAC突变为TAA，第109~111位碱基由TAC突变为TAA，致使提前引入3个终止密码子，并且TK基因C端的第157~960位碱基完全缺失，TK基因突变后的序列如SEQ ID NO.1所示。3.利用权利要求1~2任一项所述的TK基因缺失的重组猪伪狂犬病毒感染性克隆系统构建TK基因缺失的重组猪伪狂犬病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）提取猪伪狂犬病毒疫苗株Bartha
‑
K61基因组；2）将打碎的猪伪狂犬病毒疫苗株Bartha
‑
K61基因组DNA片段末端修复后与pCC1FOS载体连接，经过噬菌体包装后感染大肠杆菌获得粘粒；3）筛选用于拯救病毒的相互重叠且可覆盖Bartha
‑
K61基因组的5个Fosmid粘粒，分别为Fos
‑
Bartha
‑
1、Fos
‑
Bartha
‑
2、Fos
‑
Bartha
‑
3、Fos
‑
Bartha
‑
4和Fos
‑
Bartha
‑
5；4）将Fos
‑
Bartha
‑
2和Fos
‑
Bartha
‑
3中的TK基因缺失得到重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琦，张宇，郑海学，曹丽艳，孔祥雨，段月月，袁聪，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：