一种非限制性核酸内切酶突变体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种非限制性核酸内切酶突变体及其制备方法。本发明专利技术的一种非限制性核酸内切酶突变体，在野生型非限制性核酸内切酶氨酸酸序列上进行六个氨基酸位点的突变获得，六个氨基酸突变位点为：R65V、N66A、W67F、E135G、D136T、Q137I，所述的非限制性核酸内切酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术通过突变关键位点的氨基酸带电荷或疏水性的改变，从而改变核酸内切酶的空间结构，提高非限制性核酸内切酶的表达效率和活性。制性核酸内切酶的表达效率和活性。制性核酸内切酶的表达效率和活性。

【技术实现步骤摘要】
一种非限制性核酸内切酶突变体及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物酶
，涉及一种非限制性核酸内切酶突变体及其制备方法，具体涉及一种具有分泌表达、高活性的核酸内切酶突变体的构建和应用。

技术介绍

[0002]非特异性核酸内切酶是一类能够降解各种形式DNA和RNA的水解酶，对单链、双链、线状、环状和超螺旋形式的DNA和RNA的磷酸二酯键均具有很高的活性，产生5
’‑
磷酸核苷酸或5
’‑
磷酸寡核苷酸，且对核酸没有序列要求。可用于除去生物材料中的核酸或排除由核酸引起的干扰。
[0003]这类酶的典型代表是来源于Serratia marcescens的非特异性核酸内切酶，已经商品化，商品名该酶的基因已被克隆和在大肠杆菌中表达，由于该酶具有信号肽，生成的核酸酶被分泌到周质和培养基等不同部位。到目前为止，该酶主要是从培养基中分离纯化都得到的。但是，只有少量的酶被分泌到胞外，还有不少在周质和以无活性的前体包涵体形式存在于胞内。有人将包涵体增溶和复性，虽得到了具有活性的酶，但由于是前体蛋白，有一段信号肽，所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非限制性核酸内切酶突变体，其特征在于：在野生型非限制性核酸内切酶氨酸酸序列上进行六个氨基酸位点的突变获得，六个氨基酸突变位点为：R65V、N66A、W67F、E135G、D136T、Q137I，所述的非限制性核酸内切酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.编码权利要求1所述的非限制性核酸内切酶突变体的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.包含权利要求2所述基因的重组表达载体。4.一株大肠杆菌表达菌，其特征在于：含有权利要求3所述的重组表达载体。5.权利要求1所述的非限制性核酸内切酶突变体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)获得编码权利要求1所述的非限制性核酸内切酶突变体的基因；(2)重组表达载体pCold
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Nse
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mut的构建首先，将表达载体pCold
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I经限制性内切酶Kpn I和EcoR I双酶切处理，得到线性化的pCold
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I载体；然后，将步骤(1)获得的序列利用非连接酶依赖型单片段快速克隆连入线性化的pCold
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I载体中，制得重组表达载体pCold
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Nse
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mut；(3)重组菌Nse
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mut/BL21的构建将重组表达载体pCold
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Nse
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mut转化BL21感受态细胞，涂布于含有氨苄抗性的LB琼...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨洋，汪寄宇，
申请(专利权)人：上海拜朗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：