一种用于检测TREM2自身抗体的抗原多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测TREM2自身抗体的抗原多肽及其应用，属于免疫学技术领域。本发明专利技术提供了一种髓系细胞表面应激表达受体TREM2的抗原多肽：PLRLLILLFVTELSGAHNTTVFQG。应用TREM2抗原多肽检测阿尔兹海默病患者外周血中相应的特异性自身抗体，这种自身抗体可作为免疫标志物评估阿尔兹海默病的发病风险和痴呆相关的认知损害发展程度。这种抗原多肽及其抗体可用于制备阿尔兹海默病早期诊断试剂和开发治疗该疾病的靶向药物。和开发治疗该疾病的靶向药物。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测TREM2自身抗体的抗原多肽及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫学
，具体涉及一种用于检测TREM2自身抗体的抗原多肽及其应用。

技术介绍

[0002]阿尔兹海默病(AD)是老年人痴呆的最常见原因，其在全球范围内发病率逐年上升。但至今为止，基于认知评定的临床方式仍是AD临床上鉴别诊断的最主要方式。淀粉样蛋白
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β(Aβ)假说被广泛认为是AD最重要的发病机制。据信，Aβ异常积累到细胞外毒性斑块中是AD中神经变性和导致痴呆的重要基础。随着技术的进步，近年来涌现了一批围绕Aβ展开的AD新型诊断技术，如Aβ_PET
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CT、脑脊液的Aβ水平测定、Aβ超高灵敏度质谱等。但这些技术存在一定的局限性：1)都是在Aβ沉积产生并积累一段时间后才能进行检测，这意味着由Aβ引起的神经退行性病变已经发生且不可逆转，无法做到疾病早期的风险预警；2)基于PET
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CT或超高分辨率质谱等检测方式前期投入巨大，传导至受试者身上的单位检测价格很高，难以做到应检尽检；3)脑脊液检测需进行腰椎穿刺，受试者痛苦较大，且存在一定手术风险，因此临床上接受度不高。
[0003]研究证据表明，生物体的免疫机制在Aβ的清除中起重要作用。全基因组关联研究(GWAS)已经确定了130多个与AD相关的易感性位点，这些遗传发现提示了先天性和适应性免疫在AD发病机制中的作用，并表明细胞介导的Aβ清除的系统性失能促进了AD的发病和进展。围绕Aβ产生和积累过程中相关信号通路或生物学过程上关键靶点的自身免疫反应影响了Aβ的清除效率，在AD相关的神经退行性病变中发挥了关键作用。人体内源性蛋白抗原诱导产生的抗体被称为自身抗体，能够识别内源性蛋白分子，引起一系列免疫级联反应。在人体大脑中，小胶质细胞是清除Aβ的关键细胞。小胶质细胞与外周巨噬细胞同源，保留了较强的免疫应答功能。有研究表明，一些内源性蛋白分子的自身抗体能够激活小胶质细胞的吞噬功能。国外一些著名药企已开展AD相关的疫苗和治疗单抗临床研究(如罗氏的Aβ单抗crenezumab等)，但由于关注点都集中于Aβ本身，靶点选择面较窄，实际效果并不尽如人意。
[0004]TREM2是一个髓系细胞表面应激表达受体，是散发AD的一个GWAS风险基因，家族性AD中也发现多个TREM2基因的功能性突变。生物学功能上，该基因编码一种与TYRO蛋白酪氨酸激酶结合蛋白形成受体信号复合物的膜蛋白，免疫反应中起作用，并且可能通过触发组成性炎性细胞因子的产生而参与慢性炎症。在大脑中，TREM2是小胶质细胞监视并响应神经退行性病变信号的关键受体之一。在动物实验中，发现TREM2的抗体能够抑制小胶质细胞的炎性功能亢进状态，并修复其正常的吞噬功能。TREM2的功能调控异常在AD的疾病发展中起了关键作用。本专利技术通过自行设计的TREM2抗原表位多肽，检测AD患者血清及血浆中自身抗体水平并开发响应试剂，预测AD发生风险及病程发展程度，为临床治疗提供可靠参考。

技术实现思路

[0005]抗原抗体的结合实际上只发生在抗原决定簇和抗体的抗原结合位点之间，二者在
空间结构和空间构型上完全互补。因此抗原决定簇就可以代表整个蛋白与抗体结合的状态与亲和特征。传统酶联免疫法(ELISA)检测自身抗体主要以重组蛋白为抗原，需经过载体构建、转染、表达、筛选、纯化等一系列繁琐过程，生产成本昂贵。且完整蛋白空间结构复杂、抗原表位不易暴露，因此抗原抗体结合的特异性不强，导致信号检出率低。
[0006]基于此，有必要提供了一种检测阿尔兹海默病标志物TREM2自身抗体的抗原多肽。
[0007]为实现上述目的，本专利技术具体技术方案如下：
[0008]首先，提供了一种检测阿尔兹海默病标志物TREM2自身抗体的抗原多肽，所述抗原多肽包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列：PLRLLILLFVTELSGAHNTTVFQG，或其片段、变体、融合物或衍生物、或所述其片段、变体或衍生物的融合物，所述变体包含与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列有至少55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％同源性的氨基酸序列，纯度＞95％，pH＞7.0。
[0009]进一步地，提供了所述的抗原多肽在制备用于检测TREM2自身抗体的产品中的应用。
[0010]进一步地，所述的抗原多肽和/或TREM2自身抗体在制备阿尔兹海默病早期诊断试剂盒中的应用。
[0011]优选的，检测样本为血清或血浆。
[0012]进一步地，还提供了一种用于检测TREM2自身抗体和/或阿尔兹海默病的试剂盒，包括所述的抗原多肽。
[0013]优选的，所述抗原多肽是被包被于酶标板中。
[0014]优选的，所述抗原多肽在酶标板中包被浓度为5.0μg/ml。
[0015]优选的，还包括包被液、阳性对照、阴性对照、洗涤缓冲液、样品稀释分析液、二抗标准液、终止缓冲液、底物显色液中的至少一种。
[0016]进一步地，还提供了编码所述抗原多肽的核酸分子。
[0017]进一步地，还提供了含有所述核酸分子的重组载体。
[0018]进一步地，还提供了所述的抗原多肽或TREM2自身抗体或所述的核酸分子或所述的重组载体在制备治疗阿尔兹海默病药物中的应用。
[0019]进一步地，还提供了一种体外非诊断目的的TREM2自身抗体检测方法，包括使用所述的抗原多肽或所述的试剂盒检测样品中的TREM2自身抗体。
[0020]优选的，包括以下步骤：
[0021](1)使用包被有所述的抗原多肽的酶标板进行分步加样分析；
[0022](2)用酶标仪检测每孔中的光密度值，并用阳性样品比值表示抗体水平。
[0023]基于上述技术方案，本专利技术具有以下有益效果：
[0024]本专利技术应用TREM2抗原多肽检测到AD患者血清及血浆中的特异性自身抗体，并且该反应具有高特异性和高灵敏性，这种自身抗体可作为免疫标志物评估阿尔兹海默病的发病风险和痴呆相关的认知损害发展程度。这种抗原多肽及其抗体可用于制备阿尔兹海默病早期诊断试剂和开发治疗该疾病的靶向药物。抗原多肽所含的氨基酸序列为简单的线性多肽氨基酸序列，其对于现有重组蛋白的抗原而言，获得成本显著降低，而且与TREM2自身抗体的结合特异性强。
附图说明
[0025]图1 AD患者与健康对照血浆TREM2自身IgG抗体检测；
[0026]图2血浆TREM2自身IgG抗体水平与受试者MMSE认知评分相关性；
[0027]图3 AD患者与健康对照血浆TREM2自身IgG抗体检测ROC曲线。
具体实施方式
[0028]以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0029]下述实施例所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0030]下述实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测阿尔兹海默病标志物TREM2自身抗体的抗原多肽，其特征在于，所述抗原多肽包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列：PLRLLILLFVTELSGAHNTTVFQG，或其片段、变体、融合物或衍生物、或所述其片段、变体或衍生物的融合物，所述变体包含与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列有至少55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％同源性的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗原多肽在制备用于检测TREM2自身抗体的产品中的应用。3.根据权利要求1所述的抗原多肽和/或TREM2自身抗体在制备阿尔兹海默病早期诊断试剂盒中的应用。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，检测样本为血清或血浆。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：于欣，王华丽，张楠，谷冬梅，韦卓飞，
申请(专利权)人：北京湃德智健科技有限公司，
类型：发明
国别省市：