一种基于RPA-CRISPR-Cas12a系统快速检测幽门螺杆菌的试剂盒及方法技术方案

本发明专利技术公开了一种基于RPA

【技术实现步骤摘要】
一种基于RPA
‑
CRISPR
‑
Cas12a系统快速检测幽门螺杆菌的试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及幽门螺杆菌诊断的分子检测
，具体涉及一种基于RPA
‑
CRISPR
‑
Cas12a系统快速检测幽门螺杆菌的试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(H.pylori)是一种革兰氏阴性菌，是常见的最普遍的细菌感染。据报道，世界上一半以上的人口均受到不同程度的幽门螺杆菌的感染，发病率和死亡率都很高。患病率从瑞士的18.9％到尼日利亚的87.7％不等。感染后可导致多种胃部异常疾病，是消化性溃疡病、萎缩性胃炎、胃腺癌和黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的重要病因。幽门螺杆菌已被国际癌症研究机构(IARC)列为人类致癌物(I类致癌物)；当前针对hp的感染主要通过免疫组化染色、快速尿素酶试验和培养等侵入性检测和呼吸尿素呼气试验、粪便抗原检测和血清学分析等非侵入性检测来诊断。尽管这些检测的水平一直在提高，但它们的敏感性、成本效益、优点和缺点彼此不同，如免疫组化的方法，检测费用高本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于RPA
‑
CRISPR
‑
Cas12a系统快速检测幽门螺杆菌的试剂盒，包括：UreB基因的RPA引物及CrRNA、Cas12a酶以及ssDNA荧光探针；其中，所述UreB基因的RPA引物的核苷酸序列为：RPA
‑
Y
‑
276
‑
F：5
’‑
TGCACATCGTATTTGTCCGCAACATCTAA
‑3’
；RPA
‑
Y
‑
276
‑
R：5
’‑
AGATGGCAAAATCGCTGGCATTGGCAAAGGCGGTA A
‑3’
；所述UreB基因的CrRNA的核苷酸序列为：UreB
‑
CrRNA
‑
1：5
’‑
AAUUUCUACUGUUGUAGAUAUCGUAACUGC UGGUGGUAUUGAC
‑3’
；或UreB
‑
CrRNA
‑
2：5
’‑
AAUUUCUACUGUUGUAGAUGCAAGCGGUGUAAC AACCAUGAUU
‑3’
。2.根据权利要求1所述基于RPA
‑
CRISPR
‑
Cas12a系统快速检测幽门螺杆菌的试剂盒，其特征在于，所述ssDNA荧光探针中的碱基数为8NT
‑
14NT。3.根据权利要求2所述基于RPA
‑
CRISPR
‑
Cas12a系统快速检测幽门螺杆菌的试剂盒，其特征在于，所述ssDNA荧光探针中的碱基数为12NT，所述ssDNA荧光探针结构为FT
‑
HEX
‑
12NT
‑
BHQ1，序列为：5
’‑
HEX
‑
TTTTTTTTTTTT
‑
BHQ1
‑3’
。4.根据权利要求1所述基于RPA
‑
CRISPR
‑
Cas12a系统快速检测幽门螺杆菌的试剂盒，其特征在于，所述ssDNA荧光探针为试纸条LFD探针LFD
‑
FITC
‑
8NT
‑
Biotin，序列为：5
’‑
FITC
‑
TTTTTTTT
‑
Biotin
‑3’
。5.根据权利要求1所述基于RPA
‑
CRISPR
‑
Cas12a系统快速检测幽门螺杆菌的试剂盒，其特征在于，还包含相应的UreB基因片段的质粒标准品。6.一种非疾病的诊断和治疗目的的快速检测幽门螺杆菌的RPA检测方法，其特征在于，使用一种根据权利要求1～5中任意一项所述的基于RPA
‑
CRISPR
‑
Cas12a系统快速检测幽门螺杆菌的试剂盒对待检测样本进行检测，包括以下步骤：1)将RPA扩增体系预混物均匀分配到反应管中充分混合，所述反应管中含有RPA扩增用酶的试剂盒冻干颗粒；所述RPA扩增体系预混物包括：26.5
‑
32.5μL的RPA缓冲液、终浓度为0.24
‑
1μM的上游引物、终浓度为0.24
‑
1μM的下游引物、ddH2O和靶标DNA；2)将终浓度为500
‑
900mM的醋...

【专利技术属性】
技术研发人员：张清连，唐雪明，赵岩云，
申请(专利权)人：上海硅羿生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：